壳聚糖纳米微球介导XIAP siRNA靶向治疗乳腺癌的实验研究

论文摘要

背景与目的:RNA干扰（RNAi,RNA interference）是一种通过细胞内导入双链RNA而抑制特异基因表达的,进化保守的转录后基因沉默现象（PTGS,posttranscriptional gene silencing）,目前己证明RNAi可作为功能基因组学研究的重要工具。本文拟构建一以U6启动子为基础的,在细胞内表达短发夹状RNA（shRNA,short hairpin RNA）的DNA载体。利用壳聚糖转染,作为载体产生的shRNA在细胞内导致序列特异的基因沉默,观察其抑制肿瘤细胞的效应,同时为肿瘤基因治疗提供有效的载体。方法:以人乳腺癌细胞株MCF-7为模型,以在该细胞中高表达的XIAP为靶基因,研究本载体产生的shRNA抑制XIAP基因表达的效果,并观察其对肿瘤细胞凋亡和增殖能力的影响。用XIAP siRNA基因做报告基因,制备壳聚糖-XIAP siRNA复合体纳米粒,体外转染人乳腺癌细胞MCF-7,定性评价纳米粒的转染效率和细胞毒性。结果:U6启动子产生的shRNA在人细胞能抑制序列特异的基因表达。利用该载体产生的shRNA成功地将MCF-7细胞中的XIAP基因抑制到RT-PCR和Western blot检测不到的水平,并减低了肿瘤细胞的成瘤作用。壳聚糖XIAP siRNA质粒纳米粒能成功转染细胞并能抑制细胞生长。结论:成功构建了一个表达shRNA使特异基因沉默的DNA载体,通过RNAi抑制XIAP基因的表达能明显促进乳腺癌细胞的凋亡和抑制细胞增殖能力。壳聚糖纳米粒能作为载体,用于肿瘤细胞的转染,应用前景良好,但其对细胞的选择性、各种细胞不同的转染条件、剂量效应关系等需要进一步的探索。

论文目录

• 英文缩写词表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 第一节 用纳米技术诊断与治疗恶性肿瘤的进展
• 第二节 壳聚糖基因递送系统的研究进展
• 第三节 XIAP基因的研究进展
• 第四节 RNAi与基因沉默
• 第二章 实验研究
• 第一节 XIAP基因在人乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达以及与其它凋亡相关因子的关系
• 第二节 RNA干涉特异敲除乳腺癌细胞系XIAP基因的表达及诱导细胞凋亡
• 第三节 壳聚糖-XIAP siRNA复合体转染人乳腺细胞MCF-7的体外试验研究
• 小结
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢