Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞株SaOS-2 ezrin表达及生物学行为的影响

论文题目: Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞株SaOS-2 ezrin表达及生物学行为的影响

论文类型: 博士论文

论文专业: 外科学

作者: 杨洪平

导师: 张少成

关键词: 小干扰,干扰,骨肉瘤,侵袭,转移,实时定量

文献来源: 第二军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的应用特异性siRNA(小干涉RNA)抑制人骨肉瘤细胞ezrin基因表达,观察其对SAOS-2细胞生物学特性的影响。方法设计并化学合成2条针对ezrin基因的21nt siRNA,以150nM转染SaOS-2细胞,应用实时定量PCR检测ezrin mRNA表达,筛选出抑制效率最高的siRNA;再分别以不同浓度的siRNA转染入骨肉瘤细胞,应用实时定量PCR检测ezrin mRNA表达;再以这条siRNA及其最佳抑制浓度转染细胞,抽提孵育24、48、72、96h细胞总RNA及蛋白质,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测ezrin mRNA及蛋白质表达情况。应用MTT法检测siRNA干扰后骨肉瘤细胞的增殖能力,以Millicell PCF侵袭小室研究细胞体外侵袭、运动性变化,并检测细胞异质粘附的改变情况。结果siRNA抑制效率在9.375～150nM范围内呈浓度依赖性增高,以siRNA-1 150nM最显著;转染siRNA-1的SaOS-2细胞24、48、72、96h ezrin mRNA和蛋白质下调,分别以48h、72h最显著。siRNA干扰对细胞增殖和侵袭能力无影响,但能抑制细胞粘附和运动能力。结论特异性siRNA可以抑制ezrin基因的表达,抑制细胞粘附和运动,从而抑制骨肉瘤转移。

论文目录:

英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 Ezrin小干扰RNA设计、化学合成和筛选

材料

方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 siRNA干扰人骨肉瘤细胞ezrin表达的实验研究

材料

方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

材料

方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述一

综述二

在读期间的主要学术活动

致谢

发布时间: 2005-07-19

参考文献

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