厚颌鲂卵巢发育与卵子发生的形态和化学组分变化研究

论文摘要

2009年11月-2010年9月,从长江一级支流龙溪河泸州石洞至特兴段共收集厚颌鲂雌鱼197尾,用于其卵巢发育及卵子发生的相关研究。运用组织学方法观察了厚颌鲂卵巢发育及卵子发生的形态和结构变化,运用透射电镜观察了其卵子发生过程中的超微结构变化,运用PAS、SBB等组织化学染色方法观察了糖类、脂类及蛋白质在卵母细胞发育中的形态和分布变化,通过凯氏定氮法、索氏提取法等方法测定了蛋白质、脂类等化学组分在卵巢不同发育时期的含量变化。结果表明：根据卵巢外部形状大小及色泽等的不同,可将厚颌鲂卵巢发育过程分为6个时期：Ⅰ期卵巢呈透明状,从外表上无法辨别雌雄,组织切片可明显区分雌雄；Ⅱ期卵巢扁带状,呈肉红色,可见有微血管分布；Ⅲ期卵巢扁囊状,呈浅黄色,可见卵母细胞的粒状雏形；Ⅳ期卵巢圆囊状,黄色加深,可见明显卵粒,表面血管众多；V期卵巢囊袋状,轻压鱼腹可挤出油黄色卵粒；Ⅵ期卵巢即产卵后的卵巢,卵巢空囊状,卵巢表面充血明显,内部仅余少量正在退化的成熟卵子及卵母细胞。根据卵母细胞的形态结构、卵黄物质的积累和滤泡细胞的变化,将卵子发生划分为6个时相：卵原细胞时相,主要存在于Ⅰ期卵巢内,由成团分布的卵原细胞组成。单层滤泡细胞时相,主要存在于Ⅱ期卵巢内,此阶段开始形成产卵板,滤泡细胞开始出现且数目逐渐增多至呈单层分布；卵母细胞胞质内出现卵黄核；胞核内核仁数目增多、核仁出现空泡状结构。卵黄泡出现时相,主要存在于Ⅲ期卵巢内,此阶段滤泡细胞逐渐分化为两层；卵母细胞胞质内出现卵黄泡和生长环,卵黄泡数目逐渐增多并开始积累卵黄物质；卵膜分化出放射带和微绒毛。卵黄充满时相,主要存在于Ⅳ期卵巢内,为卵黄物质积累的主要阶段,滤泡膜三层,放射带增厚,胞质内卵黄颗粒增多,皮层泡出现并逐渐增多,膜状环明显,最后卵黄颗粒几乎充满卵母细胞。卵母细胞成熟时相,存在于Ⅴ期卵巢内,卵母细胞中充满卵黄小板,核膜消失,滤泡膜破裂,卵母细胞游离。卵母细胞退化吸收时相,存在于Ⅵ期卵巢内,卵母细胞内的卵黄物质液化,由滤泡细胞消化吸收。透射电镜下,卵原细胞中央大核仁电子致密度较高,胞质内含有丰富的核糖体、线粒体等细胞器。卵黄发生前期,核仁空泡结构明显,空泡内为比周围电子致密度低的物质；胞质内线粒体成团分布形成“线粒体云”,随后线粒体逐渐向胞质内扩展。卵黄发生早期,滤泡细胞开始分化并向卵母细胞伸出指状突起,与卵母细胞的指状突起交叉形成微绒毛；在卵膜内侧形成放射带Z1；胞质外缘出现卵黄泡,卵黄泡内开始积累卵黄物质。卵黄发生晚期,微绒毛增厚,在放射带Z1内侧出现放射带Z2、Z3,卵黄物质开始形成卵黄小板,线粒体、内质网、核糖体等参与了卵黄物质的形成。卵母细胞成熟期,卵母细胞内几乎充满卵黄小板,滤泡细胞开始退化。组织化学染色显示：糖类的积累开始于滤泡细胞出现之后并逐渐积累,主要在卵黄泡、微绒毛、放射带和卵黄颗粒、膜状环、皮层泡及卵黄小板内分布；脂类的积累开始于生长环形成之后并逐渐积累,主要在生长环、放射带、皮层泡、膜状环和卵黄颗粒、卵黄小板内分布；蛋白质的积累开始于卵原细胞时相并逐渐积累,主要在放射带、微绒毛、生长环、皮层泡、膜状环和卵黄颗粒、卵黄小板内分布。厚颌鲂卵母细胞胞质中出现的生长环应是由一种含有较多脂类,并含有糖类和蛋白质的复合物组成的；膜状环可能是生长环迁移形成的或卵黄颗粒在皮层泡外围沉积形成的；卵母细胞发育过程中卵黄物质主要以3种形态积累：卵黄泡、卵黄颗粒和皮层泡,3种卵黄物质均为含糖类、脂类和蛋白质类的复合物,但3种成分的组成比例有所不同；成熟卵细胞内的卵黄物质以卵黄小板形式存在。厚颌鲂卵巢发育至成熟过程中,卵巢均重由不足0.1g增至44.7g,成熟系数由不足0.1%变化为17.53%；卵巢所含组分中含水量最高,但卵巢含水量在卵巢发育过程中呈递减趋势；蛋白质为卵巢内的第二大组分,蛋白质含量及碳水化合物含量在卵巢发育过程中呈递增趋势；灰分含量及脂肪含量变化趋势相似,先升高再降低,然后再缓慢升高；按照各组分含能量换算出的能量密度随着卵巢的发育成熟呈递增趋势；对5种组分的增量分析显示水分增量最大,其次是蛋白质,再次是碳水化合物,灰分和脂类的增量相对较少,5种组分的增量均集中在Ⅲ-Ⅴ期阶段。

论文目录

• 中英文缩略词
• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 鱼类卵巢发育与卵细胞形成的研究
• 1.1.1 卵巢的形态和结构
• 1.1.2 卵巢发育的分期
• 1.1.3 卵母细胞发育时相的划分
• 1.1.4 滤泡细胞和卵膜
• 1.1.5 卵黄的发生和积累
• 1.1.6 卵黄物质的类型
• 1.2 卵巢的化学组分研究
• 1.3 厚颌鲂的研究概况
• 1.4 本研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 大体解剖
• 2.2.2 组织学及组织化学研究
• 2.2.3 超微结构研究
• 2.2.4 化学组分的测定
• 2.3 实验药品及仪器设备
• 3 结果
• 3.1 卵巢发育的分期
• 3.1.1 卵巢发育的外观形态
• 3.1.2 卵巢各发育时期的主要特征
• 3.2 卵子发生的组织学观察
• 3.2.1 卵原细胞时相
• 3.2.2 单层滤泡细胞时相
• 3.2.3 卵黄泡出现时相
• 3.2.4 卵黄充满时相
• 3.2.5 卵母细胞成熟时相
• 3.2.6 卵母细胞退化吸收时相
• 3.3 卵子发生的超微结构观察
• 3.3.1 卵原细胞期
• 3.3.2 卵黄发生前期
• 3.3.3 卵黄发生早期
• 3.3.4 卵黄发生晚期
• 3.3.5 卵母细胞成熟期
• 3.4 卵子发生中的组织化学观察
• 3.4.1 糖类
• 3.4.2 脂类
• 3.4.3 蛋白质
• 3.5 卵巢发育各时期化学组分含量的变化
• 4 讨论
• 4.1 核仁与核仁空泡结构
• 4.2 生长环的成分和形成
• 4.3 膜状环的成分和形成
• 4.4 卵黄物质的形态类型
• 4.5 卵黄物质的成分
• 4.6 卵巢发育过程中化学组分的变化
• 4.6.1 水份的变化
• 4.6.2 灰分和脂类的变化
• 4.6.3 蛋白质和碳水化合物的变化
• 5 小结
• 5.1 卵细胞形成的结构变化及主要特征
• 5.2 糖类、脂类和蛋白质在卵母细胞内的积累及分布
• 5.3 生长环和膜状环的成分及形成
• 5.4 皮层泡与卵黄泡的区别
• 5.5 厚颌鲂卵母细胞内卵黄物质的形态类型
• 5.6 卵巢发育过程所含化学组分的变化
• 参考文献
• 图版及说明
• 致谢
• 在校期间发表论文及参加科研实践情况