论文摘要
目的:最近发现一种新型的D1多巴胺受体,它通过耦联于Gq蛋白,激活磷脂酶Cβ（phospholipase Cβ, PLCβ）/肌醇三磷酸（Inositol-1,4,5- trisphosphate, IP3）信号级联反应而促进磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol, PI）的水解被称为PI-耦联的新型多巴胺1型受体（PI-D1受体）。星形胶质细胞是哺乳动物中枢神经系统数量最多的细胞,在中枢神经系统中发挥着重要的作用。为进一步了解这种新型受体在脑内的功能,本实验探讨SKF83959对星形胶质细胞胞内钙信号和神经递质释放的影响。方法:采用免疫荧光双标,RT-PCR,western blotting方法观察前额皮层星形胶质细胞D1多巴胺受体的表达。采用钙离子成像系统和高效液相技术检测PI-D1多巴胺受体的特异性激动剂SKF83959对前额皮层星形胶质细胞细胞内游离钙离子浓度（intracellular free calcium concentration, [Ca2+]i）和神经递质释放的影响。结果:前额皮层星形胶质细胞表达D1多巴胺受体。SKF83959能剂量依赖性的短暂增加[Ca2+]i,内质网Ca2+-ATP酶特异性抑制剂环匹阿尼酸（cyclopiazonic acid, CPA）完全阻断SKF83959的作用。在无钙外液的条件下,SKF83959仍能增加[Ca2+]i,但是幅度明显降低。L-型电压门控性钙通道（votage-gated Ca2+ channel, VGCC）阻断药维拉帕米（verapamil）,受体操纵性钙通道（receptor-operated calcium channels, ROCC）阻断剂D-α-氨基磷酸基戊酸（D-AP5）和6-氰基-7-硝基喹啉-2,3-二酮（6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione, CNQX）降低SKF83959诱导的[Ca2+]i增强作用,容量性钙内流（capacitative Ca2+ entry, CCE）也有利于SKF83959诱导的[Ca2+]i增强作用。此外,SKF83959诱导星形胶质细胞的[Ca2+]i增加能被PLC抑制剂U73122和IP3受体拮抗剂2-APB所拮抗,但不能被膜通透性环磷酸腺苷（cyclic AMP, cAMP）类似物pCPT-cAMP所阻断。实验亦发现SKF83959能促进谷氨酸和γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid, GABA）的释放,D1受体拮抗剂SCH23390和胞内钙螯合剂BAPTA-AM能阻断SKF83959诱导的神经递质释放。结论:SKF83959通过D1受体激活PLC/IP3信号通路,剂量依赖性地调节星形胶质细胞[Ca2+]i动力学,从而促进前额皮层胶质细胞谷氨酸和GABA的释放。第二部分SKF83959易化海马CA1区长时程抑制目的:研究新型的磷酸肌醇（phosphoinositide, PI）耦联的D1多巴胺受体特异性激动剂SKF83959对突触可塑性的影响及其可能的机制。方法:采用细胞外场电位记录观察SKF83959对低频刺激（low-frequency stimulation, LFS）诱导的长时程抑制（long-term depression, LTD）的影响。用western blotting方法研究SKF83959对脑片神经颗粒素（neurogranin, Ng）,钙调蛋白激酶II （calcium/calmodulin dependent protein kinase II,CaMKII）蛋白及其磷酸化蛋白表达,神经钙蛋白（calcineurin, CaN,也称为PP2B） A和B亚单位的表达。结果:SKF83959剂量依赖性地抑制场兴奋性突触后电位（field excitatory postsynaptic potentials,fEPSP）,易化LFS诱导的LTD。NMDA受体拮抗剂D-AP5部分阻断SKF83959易化的LTD。SKF83959易化的LTD可被PLC抑制剂U73122和IP3受体拮抗剂2-APB所拮抗,但不能被PKA（protein kinase A, PKA）抑制剂H-89所阻断。钙离子螯合剂BAPTA-AM阻滞SKF83959易化的LTD。CaN的抑制剂环孢素A（cyclosporin A, CsA）抑制SKF83959对LTD的易化,且SKF83959的作用与CaN A的表达增加密切相关。结论:SKF83959通过PLC信号途径易化LFS诱导的LTD,该一作用需要NMDA受体的激活和[Ca2+]i的增加,CaN激活参与了SKF83959诱发的LTD易化。