石花多糖的提取、分离、结构分析及其抗肿瘤活性的研究

论文摘要

目的:从四川省冕宁县山区所产石花中分离提取多糖,优化提取条件;纯化多糖和进行结构分析,并对得到的多糖成分WPT-B的抗肿瘤活性进行了研究。方法:采用经典的水提醇沉的方法提取石花多糖。建立了以苯酚—硫酸法测定石花多糖含量的方法。以总糖含量为考察指标,采用L9（34）正交设计的方法对提取过程中加水量、提取时间、提取次数和提取温度四因素进行了提取条件的优选研究。通过考察脱除率和多糖保存率,从几种不同的脱色和除蛋白方法中优选了粗多糖的纯化工艺。将得到的石花粗多糖用DEAE- Dextrangel A-25和Sephadex G-200层析柱进一步分离纯化,得到两个均一体多糖组分,分别命名为WPT-A和WPT-B。对这两个组分进行了分子量测定、紫外及红外分析,水解并乙酰化后进行气相色谱分析确定单糖组成及质量比例。最后对WPT-B的急性毒性和抗肿瘤活性进行了研究。结果:正交试验结果表明,多糖提取的优化条件为:温度为100℃,加10倍量的水,提取时间3h,提取3次。按此优化条件提取,经测定石花中多糖含量平均值为17.040%。优选树脂脱色法和三氯乙酸除蛋白法对石花粗多糖进行纯化,再经过两次柱层析从石花中分离得到两个单一组分:WPT-A和WPT-B。气相色谱分析结果显示,WPT-A单糖组成为:葡萄糖、木糖、甘露糖及半乳糖,其摩尔比为3:2.5:6:1,WPT-B含有葡萄糖、木糖及甘露糖,其摩尔比为5:5:3。经HPLC法分析WPT-A和WPT-B的重均分子量分别为51454和62830。对WPT-B的急性毒性和抗肿瘤活性进行了测定。在小鼠急性毒性实验中,以一次最大剂量法考察,小鼠无死亡现象;在WPT-B的抗肿瘤活性实验中,WPT-B对H22小鼠肿瘤平均抑瘤率达到58.04%,且以12mg/kg剂量组抑瘤效果最好,各组与模型组相比均存在显著性差异。在WPT-B和顺铂联合应用抗肿瘤活性实验中,各联合用药组与顺铂组相比,抑瘤率均有所提高,其中WPT-B 12mg/kg+顺铂4mg/kg组和WPT-B 24mg/kg+顺铂4mg/kg组的抑瘤效果提高显著。联合用药还可以显著降低顺铂对脾脏和胸腺的损伤,显示出良好的减毒增效作用。结论:按正交试验得出多糖提取的优化工艺,并确定了树脂脱色法与三氯乙酸法为石花粗多糖纯化的较好方法,提高了多糖提取率和保存率,所得实验条件温和,操作简便,易于今后产业化。经提取、纯化得到的两个多糖WPT-A和WPT-B同为均一体杂多糖。急性毒性实验表明,石花多糖WPT-B无明显毒性;抗肿瘤活性实验显示,其对H22小鼠移植性肿瘤具有显著的抑制作用;石花多糖WPT-B与顺铂联合应用抗肿瘤活性实验提示,两者有良好的减毒增效作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 1.石花的生物学特性
• 2.石花植物的化学成分
• 3.石花的药效学研究和其它用途
• 4.课题设计思路
• 第一部分 石花多糖的提取、分离和结构分析
• 实验一 石花粗多糖提取工艺的优选
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 石花粗多糖纯化方法的优选
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验三 石花精制多糖的提取、分离和纯化
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验四 均一体石花多糖的结构分析
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 石花多糖WPT-B的急性毒性和抗肿瘤活性实验
• 实验一 石花多糖WPT-B的急性毒性实验
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 石花多糖WPT-B的抗肿瘤活性实验
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 多糖抗肿瘤活性的研究进展
• 综述参考文献
• 致谢