表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP2/GP3重组伪狂犬病病毒的构建

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种以母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状及高死亡率为特征的传染病。寻找安全有效的抗PRRS疫苗一直是PRRS病毒（PRRSV）研究的重点。活载体疫苗可同时诱导体液免疫反应和细胞免疫反应,有利于抵抗变异性强的病毒。PRV作为一种疱疹病毒,拥有庞大的基因组和许多非必需区,具有用作表达外源基因的病毒活载体的巨大潜力,被认为是理想的活疫苗载体。 本研究在转移载体pBdTK-Uni的右侧同源臂末端增加了一个1.2Kb的片段,克服了其下游同源臂较短的缺点,使上下游同源臂的长度都超过了1Kb,以利于同源重组的发生,构建成pBdTK1.2-Uni。同时为了便于筛选重组病毒,在pBdTK1.2-Uni右侧同源臂近多克隆位点端插入由SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒,构建成新的转移载体pLTK1.2-Uni。将PRRSV GP2基因和GP3基因分别成功地克隆入pLTK1.2-Uni,构建成重组转移载体pLTK1.2-ORF2和pLTK1.2-ORF3。之后,将重组转移载体pLTK1.2-ORF2和pLTK1.2-ORF3与PRV基因组DNA用脂质体包裹后共转染Vero细胞,经蚀斑纯化,筛选到重组伪狂犬病毒。 本研究中构建的伪狂犬病病毒,为研究PRRSV GP2和GP3的功能,特别是研究GP2和GP3的免疫学特性和功能奠定了基础;为研制抗PRRS的重组伪狂犬病病毒活载体疫苗奠定了基础。本研究中构建的转移载体pLTK1.2-Uni为开发伪狂犬病病毒二价基因工程疫苗提供了条件。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 PRRS 的概况
• 1.1.1 PRRS 的流行病学
• 1.1.2 PRRS 的病原学
• 1.1.3 PRRS 发病机理
• 1.1.4 PRRSV 分子生物学
• 1.1.5 PRRS 的临床及病理学
• 1.1.6 PRRS 的诊断与防制
• 1.2 PRRSV 的疫苗研究进展
• 1.2.1 灭活疫苗
• 1.2.2 弱毒疫苗
• 1.2.3 基因工程疫苗
• 1.2.4 疫苗改进
• 1.3 PRV 的疫苗研究进展及 PRV 载体的研究
• 1.3.1 PRV 疫苗研究进展
• 1.3.2 PRV 载体的研究
• 1.4 本课题研究的的目的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 毒株和菌种
• 2.1.2 细胞
• 2.1.3 质粒和载体
• 2.1.4 试剂与工具酶
• 2.1.5 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 伪狂犬病病毒转移载体的构建
• 2.2.2 PRV 重组转移载体的构建
• 2.2.3 重组伪狂犬病病毒的获得
• 3 试验结果
• 3.1 伪狂犬病病毒转移载体的构建
• 3.1.1 pBdTK1.2-Uni 转移载体的构建
• 3.1.2 转移载体pLTK1.2-Uni 的构建
• 3.2 PRV 重组转移载体的构建
• 3.3 重组伪狂犬病病毒的获取
• 3.3.1 质粒DNA 和PRV 基因组 DNA 的共转染
• 3.3.2 重组病毒的筛选和纯化
• 4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介