论文摘要
前言恶性肿瘤的早期诊断作为肿瘤治疗的关键性的第一步直接决定了病人的预后效果。但简便、特异度和灵敏度均高的检查手段较少。蛋白质是基因指导合成的最终产物,它可以直接反映基因给予的信息。以蛋白质作为研究对象,以血清为检测样本,对整体细胞及变异细胞功能进行分析,从而可以寻找疾病的特异性标志物。表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI TOF MS)技术,为临床医生提供一种操作简便、高通量、快速测定、灵敏度和特异度均高的检测方法。目前该技术已广泛应用于卵巢癌、前列腺癌、肝癌、头颈部肿瘤、乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌、肾癌、膀胱癌、肺癌、食管癌等癌症的肿瘤标志物的研究,目的在于发现有意义的肿瘤标志物应用于癌症的早期诊断。在其他疾病研究中也有应用,如:心脏病、肾移植、艾滋病、阿尔茨海默病等。本实验应用SELDI技术检测大肠癌及大肠癌伴肝转移患者的血清中的特异性蛋白质,作为筛检和早期诊断的依据与参考。材料与方法1、病例和标本121例血清标本:大肠癌患者血清80例,来自辽宁省肿瘤医院大肠科(2006/03-2006/12)及健康人血清41例,来自辽宁省肿瘤医院体检中心。80例大肠癌均经术后病理报告确定,男性53例,女性27例。患者年龄范围19~82岁,中位年龄61岁。按大肠癌按DUKES分期法进行分期:其中A期5例;B期18例;C期21例;D期36例。伴有肝转移患者27例。肝转移患者有5例经术后病理证实,其余为术前肝脏增强CT结合临床珍断。健康人男性19人,女性22人,平均年龄55岁。2、试剂能量吸收基质(Sinapinic acid),乙酸钠(Sodium Acetate),3-环乙胺-1-丙磺酸(CHAPS),Water HPLC Grade,HCl,1%1,4二硫代苏糖醇(DTT),均购自Sigma公司。3、方法应用SELDI技术检测血清标本,进行蛋白质谱分析。4、结果判定应用ProteinChip Software 3.2.1,Biomarker Wizard进行有差异的M/Z峰的筛选。应用MATLAB6.5 NN Tools进行诊断模型的确定。5、统计分析方法应用SPSS11.5软件包进行t检验,X2检验,ROC曲线下面积计算,及ROC曲线绘制。实验结果1、大肠癌患者与健康对照样本检测M/Z峰值比较大肠癌患者与健康对照样本检测到72个蛋白质M/Z峰值有统计学意义。获得分子量为3961.44Da,4286.32Da,6438.39Da,3162.36Da,4301.49Da,4478.96Da,6844.42Da这7个蛋白质组成的模板,可将大肠癌与正常人正确分组。其中80例结直肠癌患者中有74例患者被正确分组,41例正常人均被正确识别,准确率为94.21%(114/121);敏感度为92.50%(74/80);特异度为86.96%(40/46)。2、大肠癌有肝转转移与大肠癌无肝转移样本检测M/Z峰值比较大肠癌有肝转转移与大肠癌无肝转移样本检测到5641.82Da,8703.02Da,6205.51Da,4353.81Da,3377.19Da,5907.43Da 6个蛋白质M/Z峰值在大肠癌有肝转转移病人中低表达,在大肠癌无肝转移病人中高表达。3、大肠癌有淋巴结转移与无淋巴结转移样本检测M/Z峰值比较大肠癌有淋巴结转移与无淋巴结转移样本检测到4628.80Da,7777.21Da,4602.37 Da,9410.08 Da 4个蛋白质M/Z峰值在淋巴结转移病人中明显升高,在无淋巴结转移病人中则降低。4096.51 Da蛋白质M/Z峰值在淋巴结转移病人中低表达,在无淋巴结转移病人中高表达。结论1、联合4个M/Z位于3961.44Da,4286.32Da,6438.39Da,3162.36Da的峰值的血清蛋白质纹图谱模型可以区分大肠癌与健康人。2、联合6个M/Z位于5641.82Da,8703.02Da,6205.51Da,4353.81Da,3377.19Da,5907.43Da的峰值的血清蛋白质纹图谱模型可以区分大肠癌无肝转移与有肝转移的患者,可以预测大肠癌病人是否伴有肝转移。3、M/Z位于4628.80Da,7777.21 Da,4602.37 Da,9410.08 Da和4096.516 Da的峰可以预测大肠癌淋巴结转移情况,在分子水平上进行分期。