甲戊肝炎病毒重组抗原的表达、纯化和免疫原性鉴定

论文摘要

甲肝病毒（Hepatitis A virus,HAV）和戊肝病毒是肠道传播的肝炎病毒。两种都是无包膜的正链小RNA病毒。HAV主要感染儿童,但随着年龄增加,一旦感染,肝炎症状会更严重。戊肝暴发主要发生在许多发展中国家,导致数万人感染。在孕妇患者中,戊肝致死率较高,可达20%。此外,HAV和HEV从流行病学到临床症状都很相似,主要依靠实验室检查进行鉴别。已有文献报道因饮用了被HAV和HEV污染的水而同时感染甲肝和戊肝的病例。本论文主要研究了HAV vp1和HEV ORF2编码的抗原片断形成嵌合类病毒颗粒的免疫原性。将HAV vp1（aa24～171）与HEV ORF2（aa431～615）N端相连,形成重组抗原AEAg342或与ORF2 C端相连,形成EAAg342重组抗原。将上诉两种嵌合抗原基因插入表达载体pBV220,在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。但只有重组蛋白EAAg342能形成直径10～20 nm的VLP颗粒。SDS-PAGE显示该抗原能形成部分二聚体结果,Western blot显示该二聚体能与人抗HAV和HEV阳性血清反应。本研究评价了重组蛋白AEAg342和EAAg342诱导的特异体液免疫反应。两组昆明鼠,每组5只,分别注射一种重组抗原10μg+弗氏佐剂,3周后再注射一次,同时设一组空白对照组。于第一次免疫后2,4,6,8和10周采血测特异性抗HAV和HEV IGg滴度。结果显示EAAg342诱导的抗体滴度在第8周达到了1:80 000,显著高于AEAg342组。同时,EAAg342组的抗HAV抗体滴度达到了1:7 000,也高于AEAg342组。本研究的结果说明了嵌合VLP EAAg342可以诱导良好的抗HAV和HEV免疫反应。此外,嵌入的HAV VP1片断可以增强VLP的免疫原性,同时VLP也赋予了HAV vp1良好免疫原性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 一、实验材料和方法
• （一） 实验材料
• （二） 实验方法
• 二、结果和分析
• 三、讨论
• 四、小结
• 参考文献
• 论文综述
• 附录
• 致谢
• 研究生简历