沙眼衣原体临床株的分离培养及药物敏感性研究

论文摘要

沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）是一种严格的细胞内寄生的微生物,感染人体后可以引起多种疾病。泌尿生殖道的Ct感染,除引起非淋菌性尿道炎（non-gonococcal urethritiS,NGU）外,还可引起多种并发症并给患者带来严重的心理负担。近年来,性传播疾病的发病率在全世界范围内迅猛增加,其中Ct所致的NGU已经成为最常见的性传播疾病之一。据世界卫生组织估计,每年有9300万新发病例,给社会造成严重的经济负担。泌尿生殖道Ct感染的发病率在我国有逐年增加的趋势,已成为危害公共健康的一大问题。治疗Ct感染的主要药物是抗菌药,以往认为抗菌药有超过90%的治愈率,但目前临床治疗Ct感染失败的报道愈来愈多。治疗失败不仅与病人年龄、治疗期间性交活动导致再感染有关,而且也和患者依从性、药物生物利用度、Ct载量等因素有关。而更为重要的是临床株中耐药菌株常导致治疗失败,甚至形成持续感染状态,造成感染长期不愈。随着抗菌药的不断更替和合理使用的加强,Ct对抗菌药的敏感性也不断发生着变化。Ct抗菌药敏感性试验始于20世纪70年代,至今虽然已经发展了许多药敏检测方法,但是由于Ct生长周期长、培养要求高、影响因素多等特点,敏感试验多比较繁琐、耗时,至今尚无一种公认的标准方法可以用于测定Ct药物敏感性。目的:通过细胞培养法分离得到Ct临床株,并测定10种常用抗菌药在体外对Ct的抗菌能力,了解本地区性病门诊Ct药物敏感情况,并探讨Ct药敏的变迁及临床疗效与实验结果的关系。在Ct E型标准株的基础上,建立一套适应于我所实验室的成熟可行的Ct临床株培养筛查方法和药敏试验方法,并保留Ct临床株,为进一步深入研究奠定基础。通过药敏试验,为耐药机制的研究筛查耐药菌株。方法:收集了2005年4月-2007月3月期间到天津市性传播疾病研究所门诊就诊患者的尿道或宮颈拭子194例,所有患者均符合采集标准,并记录其临床相关资料。试验以Ct E型标准株培养为基础,采用McCoy对临床标本的进行培养,所有临床株进行二代盲传培养,对二代后阳性的标本继续传代培养。90%以上McCoy细胞形成包涵体的阳性标本扩大样本量并冻存于-80℃冰箱中备用。采用培养液倍比稀释法利用96孔板测定Ct的药物敏感性。首先使用Ct E型标准株探索药敏实验条件。先确定能引起90%以上细胞感染的Ct接种量;抗菌药的工作浓度参照文献,以文献推荐浓度为中间浓度,将10种常用抗菌药:红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、四环素、多西环素、米诺环素、左氧氟沙星、司帕沙星、莫西沙星、利福平设六个等比稀释浓度。将在生长培养液中传代数次的McCoy细胞接种于96孔板37℃、5%CO2条件下孵育18～24小时,形成致密单层的细胞,按接种量加入Ct菌液,离心、去上清、加入含不同浓度抗菌药的衣原体感染液,并设立阴性、阳性对照,同前条件孵育48小时后,经碘染色后镜下观察结果。镜下未见有Ct包涵体形成的最小稀释浓度为MIE即最低抑菌浓度。将试验结果与患者临床资料的相关性进行分析。结果:首先培养临床标本194例共得到52例阳性临床株,阳性率约为26.8%。其中90%以上的细胞形成包涵体的标本有23株。对这23株标本进行药敏测定显示:红霉素的MIC范围为0.125～2μg/ml;克拉霉素的MIC范围为0.004～0.064μg/ml;阿奇霉素的MIC范围为0.0313～1μg/ml;四环素的MIC范围为0.040～0.625μg/ml;多西环素的MIC范围为0.015625～0.125μg/ml;米诺环素的MIC范围为0.002～0.128μg/ml;左氧氟沙星的MIC范围为0.0625～0.5μg/ml:司帕沙星的MIC范围为0.016～0.128μg/ml;莫西沙星的MIC范围为0.015～0.24μg/ml;利福平的MIC范围为0.001875～0.03μg/ml.显微镜下观察发现随着药物浓度的增加,包涵体形态学发生改变,失去了正常的椭圆形,并且数量减少。试验筛查到8例红霉素的耐药菌株。结论:1、成功地摸索出临床株Ct培养的方法,并提高了阳性率;保留下临床菌株,为Ct的其它相关研究奠定基础。2。成功的建立了一套适合我实验室的Ct药敏研究;并筛查到8例红霉素耐药菌株证明了天津临床上已出现了对红霉素的耐药3.试验药敏结果和临床疗效存在较大差异。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 在学期间发表文章
• 综述
• 综述正文
• 综述参考文献
• 致谢