子宫内膜异位症在位和异位子宫内膜神经生长因子及其受体TrkA、p75的表达和患者疼痛的关系

论文摘要

子宫内膜异位症（endometriosis, EMs）是一种妇科常见病,好发于育龄妇女的雌激素依赖性疾病,常表现为慢性盆腔痛/痛经和不孕,其中疼痛是EMs的特征性临床症状,严重影响患者的生活质量。EMs按病灶分布、临床表现、处理及预后的不同将其分为腹膜型（Peritoneal Endometriosis, PEM）、卵巢型（Ovarian Endometiosis, OEM）、深部浸润型（Deep Infiltrating Endometriosis, DIE）及其他部位（Other Endometriosis, OtEM）4种类型。虽然这四种类型均能引起不同类型及不同程度的临床疼痛症状,但深部浸润型相关的疼痛最明显,因此,目前对深部浸润型相关疼痛的研究报道较多,但是关于子宫内膜异位症的疼痛机制至今尚不清楚。EMs患者所致的疼痛目前认为可能与局部前列腺素增高、炎症性细胞因子异常以及异位病灶机械性牵拉等因素有关,但明确的发病机制至今仍不清楚。近年研究发现,神经生长因子通过与神经细胞受体的结合,实现神经细胞的增殖、分化,在诱导神经肽的同时增加感觉神经元的数量,对EMs的疼痛及痛觉过敏的发生有重要影响。神经生长因子（nerve growth factor, NGF）是一种具有神经元营养和促神经突起生长双重生物学功能的神经细胞生长调节因子,对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。NGF包含α,β和γ三个亚单位,活性区是p亚单位,由两个118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成的二聚体。其主要分布于脑、神经节、虹膜、心脏、脾、胎盘等组织及成纤维细胞、平滑肌、骨骼肌、胶质细胞、雪旺细胞等部位。NGF有两种受体,高亲和力受体（TrkA受体）和低亲和力受体（p75受体）。TrkA由3部分组成：即辨别并结合NGF的细胞外部、跨膜部及含酪氨酸激酶的胞质部。TrkA是NGF的功能性受体,当其与NGF结合后,可激活酪氨酸激酶信号传递系统,从而启动细胞活性,产生生物效应。p75受体是由400个氨基酸构成的膜蛋白,属于肿瘤坏死因子家族。可增加TrkA酪氨酸激酶活力,从而产生信号传递,最终提高自由基清除剂,如过氧化物酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化酶等活性,稳定细胞内Na+/K+、改变兴奋性氨基酸（EAAs）受体NMDA对EAAs的反应性,缓解EAAs的毒性,保持细胞内Ca2+水平的稳定。NGF的作用机制为与受体结合,通过受体介导的内吞机制,形成由轴膜包绕、含有NGF、并保持其生物活性的小泡,经轴突沿微管逆转运至胞体,经酪氨酸蛋白激酶、脂酰肌醇钙、内源性环腺苷酸等第二信使体系的转导,启动一系列的级联反应,对靶细胞的某些结构或功能蛋白基因的表达进行调控而发挥其生物效应。NGF及其受体p75和TrkA是否涉及EMs的发病和疼痛机制长期未受关注。最近,Tokushige等应用免疫组化方法检测EMs腹膜异位病灶中NGF和NGFRp75的表达,结果发现,腹膜异位病灶NGF和NGFRp75的表达显著高于正常腹膜,提示,NGF和NGFRp75可能参与EMs的发病。同样也有研究发现,EMs患者不同类型的异位病灶均有NGF的高表达,且与患者疼痛症状的严重程度密切相关,但NGF的特异性受体（TrkA）却不在EMs异位病灶中表达,而在临近异位病灶的神经纤维包括腹下神经和卵巢神经上表达。提示TrkA更可能涉及EMs患者的疼痛症状。迄今为止尚有一些未知内容：NGF及其受体在非EMs在位子宫内膜、EMs在位内膜中表达情况,在疼痛和无疼痛EMs患者内异病灶中的表达差别,在其他部位：如腹壁子宫内膜异位结节（Abdominal Endometriosis Node, AEM）的表达情况,仍需进一步研究。基于以上的研究背景,我们设计了本实验,采用NGF及其受体TrkA及p75作为检测指标来检测各种EMs病灶中的表达,旨在探讨神经生长因子及其受体在子宫内膜异位症发病和疼痛机制中的作用,为临床研究EMs疼痛发生机制提供实验室依据。研究目的：通过对疼痛和无疼痛的以及不同类型的子宫内膜异位症患者在位内膜及异位内膜病灶中神经生长因子（NGF）及受体（TrkA和p75）的表达,探讨神经生长因子及其受体与子宫内膜异位症患者疼痛之间的关系。材料和方法：1、研究对象：选择2008年6月至2011年6月就诊于浙江大学附属妇产科医院或杭州市第一人民医院住院手术并经病理证实为子宫内膜异位症的患者97例,其中（DIE35例,OEM42例,腹壁内异结节20例）,对照组为同期在杭州市第一人民医院住院手术并经病理确诊为子宫肌瘤且不伴疼痛患者的正常子宫内膜组织和正常宫骶韧带组织。2、研究方法2.1神经生长因子及其受体的检测应用免疫组化法检测NGF、TrkA及p75在子宫内膜异位症患者病灶以及在位内膜中的表达。2.2采用视觉模拟（VAS）评分方法给EMs组患者进行术前疼痛评分。基本的方法是使用一条长约10cm的游动标尺,一面标有10个刻度,两端分别“0”分端和“10”分端,“0”分表示无痛,“10”分代表难以忍受的最剧烈的疼痛,临床使用时将有刻度的一面背向病人,让病人在直尺上标出能代表自己疼痛程度的相应位置,医师根据病人标出的位置为其评出分数。选择“10”或者“0”分的病例。3、统计方法采用SPSS16.0件进行统计学分析。每组H-SCORES的结果采用平均数±标准差表示,各组蛋白表达的比较采用非参数检验,以P<0.05表示差异具有显著性。结果：1、DIE病灶中NGF、TrkA及p75的表达显著高于正常宫骶韧带组织（p<0.05）,而DIE疼痛患者组仅p75的表达高于DIE无疼痛患者组（P<0.05）。2、EMs患者在位内膜中NGF、TrkA及p75的表达显著高于非EMs子宫内膜（P<0.05）,但EMs疼痛患者组在位内膜仅p75的表达显著高于EMs无疼痛组（P<0.05）。3、NGF及TrkA表达于卵巢子宫内膜异位囊肿的血管上皮及其间质内,疼痛组与非疼痛组之间无明显差异（p>0.05）,而p75仅表达在疼痛患者子宫内膜异位囊肿的间质内,显著高于无疼痛组的表达,两组之间具有显著性差异（p<0.05）。4、EMs患者病灶内的NGF的表达量依次为：DIE>OEM>AEM （p <0.05）. TrkA在三组中未见明显差异（p>0.05）。p75在DIE中表达量最高（p<0.05）,其他两组间未见明显差异（p>0.05）。结论：1、DIE病灶中NGF、TrkA及p75的表达显著高于正常宫骶韧带组织,以及EMs患者在位内膜中NGF、TrkA及p75的表达显著高于非EMs在位子宫内膜,提示NGF及其受体TrkA及p75可能参与了子宫内膜异位症的发生和发展。2、DIE疼痛患者组、内异疼痛组的在位内膜和卵巢子宫内膜异位囊肿疼痛组,在本课题研究指标中,均仅有p75的表达高于相对应的无疼痛患者组,提示p75在EMs疼痛机制研究中可能是个较好的指标,其可能参与了疼痛的发生。3、DIE病灶中NGF、p75的表达量高于其他类型EMs,提示DIE发病和疼痛与NGF、p75有着更加密切的关系。

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