大熊猫粪样内类固醇激素保存方法及应用研究

论文摘要

目前利用非损伤性激素测定已可有效监测圈养大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）的各项类固醇激素水平,并进一步了解其繁殖及应激状态。但对于这一方法在野生大熊猫中的应用,尚须考虑取样延迟、野外保存等多方面的问题。本文着重研究了大熊猫粪样中四种类固醇激素的常温保存时效、保存方法以及粪样的干燥方法,旨在为野生大熊猫各项非损伤性内分泌监测工作奠定一定的理论基础,并以此推动今后野生大熊猫的保护工作。研究结果如下:1.在新鲜粪样排出后,雄性大熊猫粪样中睾酮、皮质醇以及雌性个体粪样中的睾酮,在室温条件下放置的时间不宜超过12小时;而雌性粪样中的皮质醇和雌二醇的保存时间也分别不宜超过16及24小时;孕酮则应小于8小时。2. 95%乙醇保存法可在室温条件下稳定保存雄性皮质醇15天,雌性雌二醇45天;烘箱干燥保存法（90℃,3-4小时）可稳定保存雌二醇45天。考虑野外工作的需要,依据试验数据的稳定性,大熊猫粪样内睾酮、皮质醇、雌二醇3种激素在相同的处理和保存条件下,可在60天内进行相对值的比较研究,而孕酮则需要另行探索其它保存方式。3.仅冷冻保存的雄性大熊猫粪样中的皮质醇及雌性个体中的雌二醇,以及使用95%乙醇常温保存粪样的孕酮经由烘箱干燥后,与冷冻干燥后的测定值间无显著性差异。因此对于冷冻保存及乙醇常温保存的粪样,均应尽可能采用冷冻干燥的方式进行处理。4.在2007年3月-5月,北京动物园雄性大熊猫“大地”在进入发情期后,粪样中的睾酮在5月5日达到高峰值（9.06 ng/g）,并在发情结束后再次下降至基础水平。而雌性个体“妞妞”在2007年未出现任何明显的发情迹象,其粪样中雌二醇水平也未出现明显的上升,总体呈无规律变化。5.在五一黄金周期间,随着客流量的明显上升,雌雄个体粪样中的皮质醇水平均出现了明显的升高。其中雄性大熊猫粪样中的皮质醇含量的变化与前一日的客流量显著性相关,而雌性个体粪样中的皮质醇水平则与前一日客流量存在极显著的相关性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 引言
• 1.1 类固醇激素的生理作用
• 1.1.1 雄性激素
• 1.1.2 雌激素
• 1.1.3 孕激素
• 1.1.4 皮质醇激素
• 1.2 非损伤性内分泌分析方法的发展
• 1.3 粪样内分泌分析法在野生动物研究中的应用
• 1.3.1 粪样内分泌分析法在繁殖监测中的应用
• 1.3.1.1 灵长类动物
• 1.3.1.2 非灵长类动物
• 1.3.2 粪样内分泌分析法在人为干扰评价中的应用
• 1.4 粪样内类固醇激素保存法的研究
• 1.4.1 冷冻保存法
• 1.4.2 有机溶剂保存法
• 1.4.3 干燥保存法
• 1.4.4 不同保存条件下粪样的干燥处理
• 1.5 非损伤性方法在大熊猫生理监测中的应用
• 1.5.1 睾酮水平与雄性发情能力
• 1.5.2 适时配种
• 1.5.3 妊娠诊断
• 1.5.4 假孕辨识
• 1.5.5 性别判定
• 1.5.6 应激测定
• 1.6 本研究的目的及拟解决的关键问题
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 主要仪器设备
• 2.3 取样时间及样品处理
• 2.3.1 大熊猫粪样在室温下的放置时间处理
• 2.3.2 大熊猫粪样在室温下的保存方法及时效的处理
• 2.3.3 大熊猫粪样的两种干燥处理
• 2.3.4 大熊猫发情期粪样内类固醇激素水平变化
• 2.3.5 圈养状态下游客对大熊猫的人为干扰状况
• 2.4 粪样激素的抽提
• 2.5 粪样激素的测定
• 2.6 数据统计与分析
• 2.6.1 大熊猫粪样在室温下的放置时间处理
• 2.6.2 大熊猫粪样在室温下的保存方法及时效的处理
• 2.6.3 大熊猫粪样的两种干燥处理
• 2.6.4 大熊猫发情期粪样内类固醇激素水平变化
• 2.6.5 圈养状态下游客对大熊猫的人为干扰状况
• 3 大熊猫粪样在室温下的放置时间处理
• 3.1 结果与分析
• 3.1.1 睾酮
• 3.1.2 皮质醇
• 3.1.3 孕酮
• 3.1.4 雌二醇
• 3.2 讨论
• 3.2.1 常温下粪样内类固醇激素的变化趋势
• 3.2.2 常温下粪样内类固醇激素的有效保存时间
• 4 大熊猫粪样在室温下的保存方法及时效的处理
• 4.1 结果与分析
• 4.1.1 睾酮
• 4.1.2 皮质醇
• 4.1.3 雌二醇
• 4.1.4 孕酮
• 4.2 讨论
• 4.2.1 乙醇常温保存时效
• 4.2.2 烘干后常温保存时效
• 4.2.3 大熊猫粪样内类固醇激素保存方法的可应用性
• 5 大熊猫粪样的两种干燥处理
• 5.1 结果与分析
• 5.1.1 冷冻保存粪样的干燥结果比较
• 5.1.2 乙醇常温保存样品的干燥结果比较
• 5.1.3 乙醇常温保存时效
• 5.2 讨论
• 5.2.1 两种干燥方法的比较
• 5.2.2 烘箱干燥法的可应用性
• 5.2.3 乙醇常温保存时效
• 6 大熊猫发情期粪样内类固醇激素水平变化
• 6.1 结果与分析
• 6.1.1 发情期雄性大熊猫粪样中睾酮的变化
• 6.1.2 发情期雌性大熊猫粪样中雌二醇的变化
• 6.1.3 雌雄大熊猫粪样中睾酮含量比较
• 6.2 讨论
• 6.2.1 发情期雄性大熊猫粪样中睾酮的变化
• 6.2.2 发情期雌性大熊猫粪样中雌二醇的变化
• 6.2.3 雌雄大熊猫粪样中睾酮含量比较
• 7 圈养状态下游客对大熊猫的人为干扰状况
• 7.1 结果与分析
• 7.1.1 黄金周前后大熊猫粪样中皮质醇水平的变化
• 7.1.2 雌雄大熊猫粪样中皮质醇水平的比较
• 7.2 讨论
• 8 结论
• 8.1 大熊猫粪样在室温下的放置时间处理
• 8.2 大熊猫粪样在室温下的保存方法及时效的处理
• 8.3 大熊猫粪样的两种干燥处理
• 8.4 大熊猫发情期粪样内类固醇激素水平变化
• 8.5 圈养状态下游客对大熊猫的人为干扰状况
• 参考文献
• 作者简介
• 导师简介
• 致谢