SARS冠状病毒分离鉴定、疫苗构建及免疫血清制备研究

论文摘要

本研究进行了吉林省部分SARS病人及与SARS病人密切接触人员血清和漱口液的病毒收集、病毒分离;采用荧光定量RT-PCR和ELISA方法检测了大量临床样品;从2例SARS疑似病例漱口液中分离得到了SARS病毒。人工合成了编码SARS冠状病毒（SARS-CoV）结构蛋白的基因序列,设计合成了内源性免疫刺激序列（ISS）,利用上述结构基因与表位基因分别构建了在大肠杆菌（12种质粒）、毕赤酵母（6种质粒）、哺乳动物细胞（6种质粒）中表达的系列重组质粒,并在大肠杆菌中成功表达了重组N蛋白,在毕赤酵母中表达了病毒的N蛋白和突刺S2蛋白。将DNA疫苗系列质粒免疫小鼠,结果显示除含E蛋白基因的rDNA外,含S、S1、S2、M、N蛋白基因的rDNA均能诱导抗SARS-CoV相应抗体,且使鼠脾T淋巴细胞数量均有增加,表明表达S蛋白、S1蛋白、N蛋白的rDNA作为候选疫苗。将大量制备表达S蛋白和N蛋白的rDNA疫苗注射马体,并应用大肠杆菌中表达的SARS-CoV N蛋白加强免疫,获得了高效价相应抗SARS-CoV血清;获得的抗SARS-CoV马血清经硫酸胺沉淀后粗制成抗体IgG,酶切消化,层析,获得抗SARS-CoV抗体IgG Fab2片段,其纯度达90%以上。

论文目录

• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 SARS-CoV 研究进展
• 1 SARS 病原的发现
• 2 SARS 病毒生物学特征
• 3 SARS 病毒培养
• 4 SARS 病毒抗原特性
• 5 SARS 的分子流行病学和进化
• 6 SARS 发病机理与病理学
• 7 SARS 防控及疫苗研制
• 8 结语
• 第二章核酸疫苗研究进展
• 1 DNA 疫苗免疫的作用机理
• 2 DNA 免疫的策略
• 3 影响核酸疫苗免疫效果的因素
• 4 DNA 疫苗的应用
• 5 问题与展望
• 第二篇研究内容
• 第一章SARS 病毒临床样品检测及其分离鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 SARS 病毒结构蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 SARS 病毒结构蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 SARS 病毒核酸疫苗在小鼠体内的免疫研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 DNA 疫苗与亚单位疫苗联合免疫制备马抗 SARS-CoV 抗体 IgG
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 作者简介