胃癌形成过程中hTERT选择性剪接变异体（ASVs）及其β～+ASV的表达

论文摘要

目的本研究通过检测正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌组织中hTERT选择性剪接变异体（ASVs）的表达，初步揭示胃癌多阶段演变过程中hTERT选择性剪接模式的变化；并设计选择性剪接位点特异性引物，排除无功能的hTERT ASVs的干扰，更准确地检测功能性hTERT mRNA表达水平的变化，以期为胃癌及癌前病变的诊断提供更可靠的实验依据。方法选择hTERT前体mRNA的3个选择性剪接位点—a、β、γ，在位点内或横跨位点设计引物，采用半巢式RT-PCR特异性扩增8个hTERT ASVs，通过琼脂糖凝胶电泳检测各ASVs在正常胃粘膜、胃癌前病变、胃癌组织中的表达阳性率，各ASVs经测序鉴定；在β位点序列内设计下游引物，a位点和β位点之间设计上游引物，排除β位点缺失的ASVs的干扰，采用SYBR Green实时定量RT-PCR法检测胃癌及癌前病变中β+ASV（β位点保留的ASVs）的表达水平。结果1．a+β+γ+ASV（a、β、γ位点均保留的ASV）、a缺失型ASV、β缺失型ASV（β位点保留，a、γ位点缺失的ASV）、γ缺失型ASV、aβ缺失型ASV、βγ缺失型ASV、aγ缺失型ASV经测序鉴定与目的序列完全一致，本实验未检测到aβγ缺失型ASV。2．a+β+γ+ASV在正常胃粘膜中不表达，胃癌中表达阳性率高于胃癌前病变，三组间的差异有统计学意义（P＜0.05）。3．β缺失型ASV在正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌组织中均普遍表达，阳性率的差异没有统计学意义（P＞0.05）；其余5种ASVs的表达阳性率较低，且三组间的差异没有统计学意义（P＞0.05）。4．RT-PCR显示，β+ASV在正常胃粘膜中不表达，在部分胃癌前病变和大多数胃癌组织中表达，三组间阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）。癌前病变组织中不典型增生病变（4／4）均表达β+ASV，而只有一小部分肠化生病变（2／16）表达β+ASV。5．荧光实时定量RT-PCR检测显示，胃癌中β+ASV的表达水平比胃癌前病变高6.99倍。结论胃癌的多阶段演变过程中hTERT选择性剪接模式是不同的，主要表现为α+β+γ+ASV表达升高；无功能的β位点缺失的hTERT ASVs在胃癌形成过程中普遍表达，容易导致功能性hTERT mRNA定性检测的假阳性或定量检测的不准确；胃癌形成过程中β+ASV表达水平逐步升高，提示β+ASV的检测可能为胃癌及癌前病变的诊断提供实验依据。

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