青藤碱对佐剂关节炎大鼠HPA轴、外周血单个核细胞皮质酮受体及滑膜组织CRH、ACTH表达的影响

论文摘要

目的:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一类以慢性、对称性、多关节炎症为主要表现的自身免疫性疾病,最终可影响关节功能甚至致残。其侵犯的靶器官主要是关节滑膜。该病的病因尚不完全明确。近年来,神经-内分泌-免疫网络途径在RA的发病机制中越来越受到重视。业已证实,该系统对RA发病的免疫调节主要是通过下丘脑-垂体-肾上腺轴（hypothalamic-pituitary-adrenal axis, HPA轴）实现的。HPA轴在抑制RA炎症反应和免疫功能调节中具有重要作用。糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor, GCR）不仅是糖皮质激素（glucocorticoid, GC）或皮质醇（大鼠体内为皮质酮）免疫信号的介导者,其本身也是机体免疫调节的有效工具。其与靶细胞结合量的变化可能与RA的发生、发展有一定的内在联系。青藤碱（sinomenine）可能是通过HPA轴,增强肾上腺皮质激素的分泌,起到非特异性抗炎作用。然而,对于青藤碱通过HPA轴治疗RA的临床和实验室研究目前开展的很少。本课题以佐剂关节炎（adjuvant-induced arthritis, AA）大鼠模型为基础,观察研究青藤碱对其关节炎症程度,血浆促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin release hormone, CRH）、促肾上腺皮质激素（adrenocorticotrophic hormone, ACTH）和皮质酮,滑膜组织CRH、ACTH表达以及外周血单个核细胞GCR表达的影响,探讨HPA轴在RA发病机制中的作用以及青藤碱的治疗效果。方法:（1）将125只雄性Wistar大鼠随机分为5组,每组25只。Ⅰ组:正常对照组,Ⅱ组:单纯造模组,Ⅲ组:造模+低剂量青藤碱治疗组,Ⅳ组:造模+中剂量青藤碱治疗组,Ⅴ组:造模+高剂量青藤碱治疗组。第ⅡⅤ组每只大鼠多点皮内注射完全性弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant, CFA）制作AA大鼠模型。造模成功率依据关节炎指数（arthritis index, AI）评定。各组又根据造模后不同时间点（7、14、28、35及42天）各分为5个亚组。（2）造模后第14天开始,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组分别给予青藤碱注射液15mg/kg·d,30mg/kg·d,60mg/kg·d肌肉注射治疗。（3）测定不同时间点各组大鼠的踝关节下足垫厚度,并进行AI评分。（4）应用放射免疫分析法检测不同时间点各组大鼠血浆CRH、ACTH及皮质酮浓度。（5）应用放射配体结合分析法检测外周血单个核细胞GCR表达情况。（6）对不同时间点各组大鼠滑膜组织进行CRH、ACTH的免疫组织化学染色,采用真彩病理图象分析系统进行定量分析。（7）观察不同时间点各组大鼠踝关节病理改变,并进行病理积分评定。（8）应用SPSS 14.0统计软件进行统计学分析。结果:（1）AI:第Ⅱ组大鼠造模后各时间点AI均高于第Ⅰ组（P<0.01）,高峰出现在造模后28天;3542天Ⅳ组、Ⅴ组AI低于Ⅱ组（P<0.05）,Ⅲ组与Ⅱ组之间AI无统计学差异（P>0.05）;Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组之间各时间点AI值无统计学差异（P>0.05）。（2）踝关节下足垫厚度:第ⅡⅤ组大鼠足垫厚度均于造模后14天开始增厚,2128天达峰值,之后逐渐下降,42天足垫厚度仍高于正常对照组值（P<0.01）;Ⅴ组于28天足垫厚度低于Ⅱ组（P<0.05）,较Ⅳ组提前14天,即Ⅳ组第42天足垫厚度低于Ⅱ组（P<0.01）,Ⅲ组各时间点足垫厚度与Ⅱ组比较无统计学差异（P>0.05）;Ⅴ组于28天足垫厚度低于Ⅲ组（P<0.05）,较Ⅳ组提前7天,Ⅴ组于35天足垫厚度低于Ⅳ组（P<0.05）。（3）血浆CRH浓度:与Ⅰ组比较,ⅡⅤ组在造模后35天血浆CRH浓度水平显著下降（P<0.01）,至造模后42天虽ⅢⅤ组有所上升（P<0.05）,但ⅡⅤ组仍低于正常对照组值（P<0.05）;与Ⅱ组比较,ⅣⅤ组血浆CRH浓度在35天以后明显升高（P<0.05）,Ⅲ组在42天时高于Ⅱ组（P<0.01）,提示中剂量和高剂量在35天时显示出治疗效果,可提高AA大鼠血浆CRH水平,较低剂量提前7天;3542天时,Ⅳ组血浆CRH浓度高于Ⅲ组,Ⅴ组高于Ⅳ组且均具有统计学差异（P<0.01）,提示高剂量治疗效果优于中剂量,而中剂量又优于低剂量。（4）血浆ACTH浓度:与Ⅰ组比较,ⅡⅤ组在造模后14天血浆ACTH浓度水平显著上升（P<0.01）,28天达到高峰,后虽ⅢⅤ组有所下降（P<0.05）,但至造模后42天ⅡⅤ组仍高于正常对照组值（P<0.01）;与Ⅱ组比较,Ⅴ组血浆ACTH浓度在35天以后降低（P<0.05）,Ⅳ组在42天低于Ⅱ组（P<0.01）,提示高剂量组在35天时显示出治疗效果,可降低AA大鼠血浆ACTH水平,较中剂量组提前7天,低剂量组在观察时间内未显示出治疗效果;35天时,Ⅴ组血浆ACTH浓度低于Ⅲ组（P<0.05）,42天时,Ⅳ组血浆ACTH浓度低于Ⅲ组,Ⅴ组低于Ⅳ组（P<0.05）,提示高剂量组起效最早,且治疗效果最佳。（5）血浆皮质酮浓度:与Ⅰ组比较,ⅡⅤ组在造模后14天血浆皮质酮浓度水平显著下降（P<0.01）,28天降至最低,后虽ⅣⅤ组血浆皮质酮浓度有所上升（P<0.05）,但至造模后42天ⅡⅤ组血浆皮质酮水平仍低于正常对照组值（P<0.01）;与Ⅱ组比较,ⅣⅤ组皮质酮浓度在35天以后高于Ⅱ组（P<0.05）,而Ⅲ组在各时间点血浆皮质酮浓度与Ⅱ组相比无统计学差异（P>0.05）。提示中、高剂量组在35天时显示出治疗效果,可提高AA大鼠血浆皮质酮水平,而低剂量组在观察时间内未显示出治疗效果;35天时,Ⅴ组血浆皮质酮浓度高于Ⅲ组、Ⅳ组（P<0.05）,Ⅲ组与Ⅳ组之间无统计学差异（P>0.05）,42天时,Ⅳ组血浆皮质酮浓度高于Ⅲ组（P<0.05）,Ⅴ组高于Ⅳ组（P<0.01）,以上提示高剂量组治疗效果优于中剂量组。（6）外周血单个核细胞GCR表达:与正常对照组比较,AA模型组外周血单个核细胞GCR表达下降（P<0.01）,经高剂量青藤碱治疗28天后GCR表达较模型组上升（P<0.05）,但仍低于正常水平（P<0.05）,提示青藤碱能够提高AA大鼠外周血单个核细胞GCR表达。（7）滑膜组织CRH、ACTH表达:与Ⅰ组比较,ⅡⅤ组滑膜组织CRH、ACTH的表达量在各个时间点均明显升高（P<0.01）,Ⅱ组表达最强,峰值出现于造模后28天,后逐渐下降;与Ⅱ组比较,3个治疗组都能够降低AA大鼠滑膜组织CRH、ACTH的表达量（P<0.01）,其中高剂量青藤碱在造模后28天就显示出此作用,中剂量于造模后35天起效,低剂量起效最晚,为造模后42天;28天时Ⅴ组滑膜组织CRH、ACTH表达低于Ⅲ组和Ⅳ组（P<0.01）,3542天时,Ⅴ组低于Ⅳ组、Ⅳ组低于Ⅲ组（P<0.01）,提示高剂量治疗效果优于中剂量,而中剂量又优于低剂量。（8）踝关节病理积分:造模后各个时间点,Ⅱ组病理积分均显著高于Ⅰ组（P<0.01）,其中2842天最高;3种剂量的青藤碱均能降低病理积分,其中高剂量作用最强,3542天Ⅴ组病理积分较Ⅲ组、Ⅳ组低（P<0.05）。（9）相关性分析:踝关节下足垫厚度分别与AI、血浆ACTH浓度、滑膜组织CRH、ACTH表达量之间呈正相关,P<0.01;而与血浆CRH、皮质酮浓度之间分别呈负相关,P<0.01;血浆ACTH浓度分别与滑膜组织CRH、ACTH表达量之间呈正相关,P<0.01;滑膜组织CRH与ACTH表达量之间呈正相关,P<0.01。结论:（1）AI与踝关节下足垫厚度呈正相关,均能反映关节肿胀情况,后者更为精确、客观。（2）造模后AA大鼠血浆CRH降低,ACTH升高,皮质酮浓度降低,提示HPA轴存在功能缺陷,而且可能同时发生在下丘脑和肾上腺水平。经青藤碱治疗后各项指标有所恢复,但不能至正常水平。青藤碱治疗效果与剂量、时间相关。剂量越大,时间越长,治疗效果越好。（3）造模后AA大鼠外周血单个核细胞GCR表达降低,经高剂量青藤碱治疗后有所恢复,但不能至正常水平。提示AA发病过程中GCR表达降低,且青藤碱具有一定的治疗作用。（4）造模后AA大鼠滑膜组织CRH、ACTH表达显著高于正常对照组,经青藤碱注射液治疗后有所恢复,且其治疗效果与剂量、时间相关。（5）青藤碱可以降低AA大鼠踝关节病理积分,抑制病理变化过程。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 青藤碱对佐剂关节炎大鼠HPA轴、外周血单个核细胞皮质酮受体及滑膜组织CRH、ACTH表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 类风湿关节炎与下丘脑－垂体－肾上腺素
• 致谢
• 个人简历