齐墩果酸治疗皮肤增生性瘢痕的作用机制研究

论文摘要

增生性瘢痕是皮肤创伤愈合后瘢痕持续增生的一种病理现象,是病理性瘢痕的一种。它的形成与纤维细胞的异常增生、胶原的过度生成和细胞外基质过度沉淀有关,常见于深度烧伤,炎症和外伤等的创伤后修复。增生性瘢痕以红肿、明显高出于皮肤和病变皮肤瘙瘁扭曲,并伴随着挛缩为特点。压迫感、僵硬感、关节灵活性丧失和变形常使病变部位瘙痒疼痛,并有一系列的功能障碍和影响美观。对于瘢痕的治疗目前有许多手段,但尚未有一种方法能够完全有效且永久有效而无副作用,而天然药物在许多疾病的治疗中的重要作用已被广泛接受。本研究采用组织培养的方法分离出瘢痕成纤维细胞,通过MTT测定细胞的活力并计算其增殖抑制率。通过流式细胞仪测定成纤维细胞的凋亡作用,AV/PI双染用于测定细胞的凋亡率,PI检测DNA含量,DCFH-DA测定细胞ROS水平,罗丹明123测定线粒体膜电位。用蛋白质印迹法检测成纤维细胞的凋亡信号转导通路的磷酸化p38MAPK和磷酸化JNK蛋白,以及在凋亡中起关键作用的蛋白caspase-3和AIF的表达情况。通过建立兔耳瘢痕模型,从整体动物水平对齐墩果酸的药效做进一步考察。兔耳瘢痕被随机分为5组,分别为模型组、低剂量组（2.5%）、中剂量组（5%）、高剂量组（10%）和阳性药组（contractubax）,正常组的兔耳不做任何处理。给药22天后,检测瘢痕组织中的Ⅰ型和Ⅲ型胶原、转化生长因子（TGF-β1）、基质金属蛋白酶1（MMP-1）的含量,并测定瘢痕增生指数（SEI）。实验结果表明齐墩果酸能够抑制瘢痕成纤维细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性,流式检测的结果显示,齐墩果酸能够诱导瘢痕成纤维细胞凋亡,降低线粒体膜电位,但可能不是通过升高细胞ROS水平而进一步诱发凋亡。在给予齐墩果酸处理后,蛋白印迹结果显示caspase-3和AIF均被激活,磷酸化p38和磷酸化JN蛋白的表达均上调。在兔耳瘢痕模型中,给药22天后,兔耳瘢痕组织中的TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原的含量都显著降低,而MMP-1的水平显著的升高,SEI也明显的降低,组织切片显示瘢痕组织中的胶原纤维排列趋于正常,成纤维细胞的数目减少。综上,齐墩果酸能够抑制瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡；在兔耳瘢痕模型中,齐墩果酸能够抑制兔耳瘢痕的形成。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 瘢痕成纤维细胞的分离和培养
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、分析与讨论
• 四、小结
• 第二章 齐墩果酸对增生性瘢痕成纤维细胞的影响
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、分析与讨论
• 第三章 齐墩果酸对增生性瘢痕成纤维细胞信号通路的影响
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、分析与讨论
• 第四章 齐墩果酸对兔耳增生性瘢痕的影响
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、分析与讨论
• 四、小结
• 第五章 研究总结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 在读期间发表论文和科研情况
• 致谢
• 个人简历