橙皮苷抗呼吸道炎症作用效果的实验研究

论文摘要

以呼吸道炎为主要表现和特点的疾病在呼吸系统疾病中占有很大的比例,因此,在治疗中选择有效的抗炎作用药物显得尤为重要。天然药物作为重要药物资源在药物治疗学方面受到越来越多的重视,而且对制作特定功能的药物,中草药作为原料药物也得到很多的应用。橙皮苷是来源于水果和蔬菜的一种天然的黄酮类化合物,目前研究证明橙皮苷有多种药理作用,主要包括抗老化、抗炎、抗高血脂及抗癌作用。而对于橙皮苷在抗呼吸道炎症方面的效果目前还缺乏足够的论证。为了确证橙皮苷在抗呼吸道炎症中的治疗作用,我们应用LPS刺激小鼠RAW264.7细胞,观察橙皮苷对LPS诱导性炎的体外作用效果。此外,应用急性肺损伤及过敏性哮喘动物模型来确证橙皮苷的体内抗呼吸道炎作用并初步探讨其抗炎的作用机制。首先,通过LPS刺激RAW264.7细胞产生体外的炎症反应,观察橙皮苷对炎性细胞因子TNF-α,IL-1β和IL-6分泌的影响。结果显示:橙皮苷可以显著抑制炎症性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌,因而在炎症过程中,橙皮苷可能通过调节炎性细胞因子的分泌从而发挥抗炎作用。为确证橙皮苷的体内抗呼吸道炎作用,我们应用LPS滴鼻法建立小鼠的急性肺损伤模型。LPS或内毒素是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,吸入LPS会导致急性的、以嗜中性粒细胞增生为主的气道炎症反应,这些分子机制与LPS侵入时的识别受体相关,同时伴随着前炎症细胞因子的表达。本实验主要检测橙皮苷对小鼠急性肺损模型肺泡灌洗液中相关炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6分泌和炎细胞聚集的影响;观察橙皮苷对小鼠急性肺损模型肺湿重/干重比值、病理学变化;应用western-blot的方法观察橙皮苷对LPS经典的NF-κB信号传导通路中IκB表达的影响。IκB是NF-κB的抑制蛋白,正常情况下NF-κB与IκB结合而被束缚于细胞浆中,当细胞受到外介物质,如LPS、双链RNA和病毒刺激后,IκB可发生降解,从而暴露NF-κB的核定位信号,使NF-κB由胞浆入核,并与特定基因的κB部位结合,活化靶基因的转录。本次试验结果表明:与模型组相比,橙皮苷可以抑制相关细胞因子的分泌和炎细胞的聚集、减弱肺水肿的程度、增加IκB的表达,结果说明橙皮苷可能通过抑制IκB的降解而减弱NF-κB的激活,从而抵御LPS诱导的以呼吸的急性炎症反应。对于橙皮苷抗气道的慢性炎症反应的作用效果,我们通过用OVA诱导小鼠产生支气管哮喘模型,检测橙皮苷对哮喘小鼠相关征象的影响来完成。过敏性哮喘是一种漫长的气道变应性疾病,以气道炎症、粘液分泌增多、气道的高反应性为主要特征,且血清中IgE水平增高及肺泡灌洗液中存有高浓度的Th2细胞因子。本实验主要观察橙皮苷对小鼠哮喘模型肺泡灌洗液中Th2型炎性细胞因子IL-4、IL-5、IL-13和炎细胞聚集的影响;观察橙皮苷对小鼠哮喘模型肺脏病理学变化及气道高反应性的作用。此次实验结果表明:应用橙皮苷后,小鼠模型血清IgE、支气管肺泡灌洗液中的Th2型炎性细胞因子IL-4、IL-5、IL-13和炎细胞总数与OVA刺激组相比显著降低;肺组织切片显示橙皮苷对炎性细胞的浸润、气道黏液的分泌、杯状细胞增生都有显著抑制作用;针对气道高反应性方面,通过检测经过不同浓度的乙酰甲胆碱刺激,监测气道阻力和肺顺应性来进行。结果表明,OVA刺激后气道阻力增加、肺顺应性降低。经橙皮苷作用后,与OVA刺激组相比,气道阻力显著降低,同时肺顺应性有所恢复。本研究的创新之处在于初步确证了橙皮苷的抗呼吸道炎作用效果,揭示了橙皮苷可能通过阻止I?B的降解来减弱NF-κB的激活以此对抗LPS诱导的呼吸道急性炎症反应;同时证明了橙皮苷对过敏性哮喘的慢性气道炎症也有一定的抑制作用,这种抗炎作用可能与橙皮苷下调变应原的致敏作用和Th2型细胞因子的偏倚作用有关。本研究将为橙皮苷作为抗呼吸道炎症药物的应用提供新的思路和依据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 绪论
• 第1篇 文献综述
• 第1章 脂多糖诱导的NF - κB 传导通路研究进展
• 1.1 LPS 相关结合蛋白
• 1.2 LPS 信号传导的跨膜机制
• 1.3 胞内NF-κB 传导通路的激活
• 1.4 结语
• 第2章 两种呼吸道炎症性疾病发病机制研究进展
• 2.1 LPS 与急性肺损伤
• 2.2 支气管哮喘
• 2.3 结语
• 第3章 橙皮苷的药理作用研究进展
• 3.1 橙皮苷的结构
• 3.2 橙皮苷的理化性质
• 3.3 橙皮苷的药理作用
• 3.4 橙皮苷的安全性
• 3.5 结语
• 第2篇 研究内容
• 第1章 橙皮苷对体外LPS 诱导的细胞因子影响
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验结果
• 1.4 讨论
• 1.5 小结
• 第2章 橙皮苷对LPS 诱导小鼠ALI 的保护作用
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第3章 橙皮苷对OVA 致小鼠支气管哮喘的干预作用
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 作者简介及在读期间科研成果
• 致谢