褪黑素对大鼠非酒精性脂肪肝及肝内CYP2E1、HO-1表达的影响

论文摘要

目的 建立非酒精性脂肪肝模型，观察褪黑素（MT）对非酒精性脂肪肝大鼠血清转氨酶，体内脂质，SOD，GSH-PX，MDA以及肝脏形态学、CYP2E1和HO-1表达的影响。 方法 雄性Wistar大鼠50只，随机分成5组每组10只，正常对照组予普通饲料，模型组、MT低剂量组、MT中剂量组、MT高剂量组予高脂饮食12周。各MT干预组依次给予MT（含≤1％无水乙醇）2.5mg·kg-1·d-1、5.0mg·kg-1·d-1和10.0 mg·kg-1·d-1腹腔注射，正常对照组、模型组予等量生理盐水（含1％无水乙醇）腹腔注射，12周末处死称体重及肝湿重并计算肝指数，进行肝脏病理学检查，生化法测定血清丙氨酸转氨（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-Px）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）；肝匀浆TG，TC，SOD，MDA，GSH-Px。免疫组织化学法测定肝脏细胞色素P4502E1（CYP2E1）和血红素加氧酶-1（HO-1）的表达。 结果 12周高脂饮食成功复制大鼠NAFL／NASH模型。与正常对照组比较，模型组大鼠肝湿重及肝指数明显增高（P＜0.01）；肝细胞呈中—重脂肪变性，肝小叶内见灶性炎细胞浸润和点状坏死；血清ALT（P＜0.05），AST，TC，MDA值（P＜0.01）以及肝匀浆TG，TC，MDA值明显升高（P＜0.05）；血清及肝匀浆SOD，GSH-Px水平明显减低（P＜0.01，P＜0.05）；肝脏CYP2E1及HO-1的表达明显增加（P＜0.01）。药物干预组中以MT中、MT高剂量组作用明显。与模型组比较，MT中、高剂量组肝湿重及肝指数明显减低（P＜0.01，P＜0.05）；肝脏病理变化改善明显，多呈轻—中度脂肪变性，炎症活动度积分明显减低（P＜0.05）；血清及肝匀浆SOD(P＜0.05，

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
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• 1.前言
• 2.材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 动物
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器、设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 大鼠非酒精性脂肪肝模型的制备
• 2.2.1.1 模型的制备
• 2.2.1.2 给药实验
• 2.2.2 一般情况观察
• 2.2.3 动物处理和标本制备
• 2.2.4 大鼠血清生化检测
• 2.2.5 血清及肝匀浆SOD,GSH-PX活力和MDA含量的测定方法
• 2.2.5.1 总-SOD活力的测定
• 2.2.5.2 丙二醛的测定
• 2.2.5.3 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定
• 2.2.6 肝组织病理结果评价
• 2.2.7 CYP2E1和HO-1的免疫组织化学染色方法
• 2.2.8 免疫组化结果判断
• 2.3 数据处理和统计学分析
• 3.结果
• 3.1 大鼠NAFL／NASH模型的的建立
• 3.1.1 一般情况
• 3.1.2 大鼠肝湿重、肝指数变化
• 3.1.3 血清ALT,AST,TC,TG变化
• 3.1.4 肝匀浆脂质变化
• 3.1.5 血清SOD,GSH-PX,MDA变化
• 3.1.6 肝匀浆SOD,MDA,GSH-PX变化
• 3.1.7 肝脏病理学改变
• 3.1.7.1 肉眼大体观察
• 3.1.7.2 光镜观察
• 3.1.8 肝脏组织内CYP2E1表达情况
• 3.1.9 肝组织内HO-1蛋白表达情况
• 3.2 褪黑素对NAFL／NASH大鼠的干预作用及可能机制
• 3.2.1 MT对NAFL／NASH大鼠体重的影响
• 3.2.2 MT对NAFL／NASH大鼠肝湿重、肝指数的影响
• 3.2.3 MT对NAFL／NASH大鼠血清ALT,AST,TC,TG水平的影响
• 3.2.4 MT对NAFL／NASH大鼠肝脏脂质的影响
• 3.2.5 MT对NAFL／NASH大鼠血清SOD,GSH-PX,MDA水平的影响
• 3.2.6 MT对NAFL／NASH大鼠肝匀浆SOD,MDA,GSH-PX水平的影响
• 3.2.7 各MT干预组肝脏的病理学改变
• 3.2.7.1 大体肉眼观察
• 3.2.7.2 光镜观察
• 3.2.8 MT对NAFL／NASH大鼠肝脏组织内CYP2E1表达的影响
• 3.2.9 MT对NAFL／NASH大鼠肝组织内HO-1蛋白表达的影响
• 3.2.10 肝脏HO-1表达与肝匀浆MDA,GSH-PX值相关性比较
• 4.讨论
• 4.1 NAFL／NASH模型的建立和特点
• 4.2 大鼠NAFL／NASH中SOD,GSH-PX,MDA水平以及肝脏CYP2E1,HO-1表达的变化
• 4.3 褪黑素在NAFL／NASH形成中的干预作用
• 4.3.1 MT对NAFL／NASH大鼠体重的影响
• 4.3.2 MT对NAFL／NASH中转氨酶,脂质及肝脏病理学的影响
• 4.3.3 MT对NAFL／NASH中SOD,GSH-PX水平及MDA含量的影响
• 4.3.4 MT对NAFL／NASH大鼠肝脏CYP2E1,HO-1表达的影响
• 5.结论
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢
• 综述
• 附图