COX-2对脓毒症大鼠肝损伤的影响

论文摘要

目的本实验通过建立盲肠结扎穿孔（CLP）动物模型，研究环氧合酶2在脓毒症大鼠的肝组织炎症反应中的表达及其干预剂NS-398的作用，旨在为临床防治脓毒症提供新思路，尤其是探索保护肝细胞的有效方法。方法选择体重相近Wistar大鼠54只随机分为3组：A假手术组；B脓毒症模型组；C NS-398干预组。通过建立盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症动物模型，用RT-PCR方法检测肝组织COX-2 mRNA的表达，酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清IL-6、TNF-α、IL-10水平变化，免疫组织化学法测定肝细胞NF-κB表达，流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞百分率的变化，同时观察肝脏病理变化和肝功能改变。结果1．肝组织中COX-2 mRNA在A组呈低表达（1040.82±2.77）；CLP造模后3h表达明显增强（2064.04±6.78），到6h达到高峰（3992.45±16.75），12h、24h仍呈高表达（2916.80±6.79，2237.80±7.42）。NS-398干预后各时点COX-2 mRNA表达较脓毒症组显著降低，但是仍然高于A组；2．各时点IL-6水平在B组改变较A、C组明显增高（P＜0.05）；IL-10水平C组高于A、B组（P＜0.05）；C组TNF-α变化与B组相比虽有降低趋势，但是无统计学差异（P＞0.05）；3．CLP术后CD4+／CD8+比值下降；相同时间点比较，CD4／CD8比值C组高于B组（P＜0.05）；4．肝细胞中NF-κB在A组低表达，CLP术后NF-κB表达增高；相同时间点比较，C组高于B组（P＜0.05）；5．Pearson相关分析，COX-2 mRNA与NF-κB呈直线正相关，r=0.685，P＜0.042；6．B组病理损伤重，干预后C组肝脏病理损伤减轻；7．CLP术后B组ALT、AST明显增高，NS-398干预后相同时段比较，C组与B组有显著性差异（P＜0.05）。这与COX-2 mRNA变化基本相同。结论1．COX-2选择性抑制剂NS-398显著抑制COX-2的表达；2．COX-2在脓毒症中扮演重要角色，其作用途径可能是通过改变促／抗炎细胞因子之间和CD4+和CD8+T细胞之间的动态平衡，同时作用于特异性和非特异性免疫系统，使机体免疫状态更加紊乱，从而影响脓毒症的肝脏损伤；3．COX-2选择性抑制剂NS-398通过抑制NF-κB的表达，恢复促／抗炎细胞因子之间和CD4+和CD8+T细胞之间的动态平衡，从而对脓毒症肝损伤具有一定保护作用，有望成为一种新的脓毒症免疫调理药物。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1.脓毒症相关概念的变化
• 2.脓毒症的发病机制、治疗策略新进展
• 3.核因子-κB研究与脓毒症
• 4.环氧合酶及其抑制剂的研究进展
• 实验材料与方法
• 实验材料、仪器及设备
• 试剂配制方法
• 实验分组及给药方法
• 动物模型的建立
• 统计学方法
• HE染色实验法
• 免疫组织化学法（SABC法）
• 流式细胞术实验法
• 半定量RT-PCR实验法
• 酶联免疫吸附实验
• 电镜观察方法
• 结果
• 1.RT-PCR实验结果
• 2.酶联免疫吸附实验结果
• 3.不同时段COX-2与IL-6、IL-10及TNF-α关系变化
• 4.流式细胞术实验结果
• 5.免疫组化实验结果
• 6.大体病理及电镜观察结果
• 7.肝功能ALT、AST变化
• 8.HE染色结果
• 讨论
• 1.COX-2与脓毒症肝损伤
• 2.COX-2与脓毒症免疫功能紊乱
• 3.COX-2和NF-κB在脓毒症肝损伤中相互作用
• 结论
• 综述1
• 综述2
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表论文
• 缩略词表
• 附件