日粮精粗比对组胺在奶山羊瘤胃中生成和肝脏中代谢的影响

日粮精粗比对组胺在奶山羊瘤胃中生成和肝脏中代谢的影响

论文摘要

奶产业是我国重要的发展产业之一,也是改善居民膳食结构的重要战略性产业,奶业的发展水平既是一个国家农业发展水平高低的重要标志,也是一个国家人民生活水平高低的重要指标。我国由于缺少优质的粗饲料,因此精饲料常常被大量使用以满足动物机体对营养的需求,但是大量饲喂高精料日粮会使瘤胃内发生异常发酵,严重时会发生急性瘤胃酸中毒,慢性时会发生亚急性瘤胃酸中毒,尤其是后者,由于其发病率高、临床症状不明显,常常会对生产造成十分巨大的损失。组胺是一种自体活性物质,正常生理条件下身体含有微量组胺,不会对自体产生危害,当反刍动物大量采食精料后,瘤胃内会产生大量的组胺,肝脏是组胺代谢的主要场所,当外周血中组胺含量过高时,将增加血管的通透性,可以直接或间接引起各种炎症,在奶牛中常见的如乳房炎、蹄叶炎等,这些疾病将会降低奶牛的生产能力,再加上我国的反刍动物日粮水平的日粮精粗比在4:6和6:4之间,因此,探讨在日粮精粗比为4:6和6:4下对组胺在奶山羊瘤胃内生成和肝脏中代谢的影响具有很高的学术价值和实用价值。试验Ⅰ、瘤胃液和血液中组胺测定方法的建立本试验采用RP-HPLC来测定组胺,采用紫外检测器检测,样品经0.5mol·L-1的盐酸提取后,用丹磺酰氯进行柱前衍生,色谱柱为Agilent ZORBAX 80A Extend- C18 (4.6mm×250mm,5μm),流动相A为乙腈,流动相B为0.1%乙酸铵,采用等梯度洗脱,流动相比例为A:B=80:20,流速:1.0mL min-1,进样量:20μ1,柱温:30℃,紫外检测波长:254 nm,最后得到标准曲线为y=0.0008x+0.0568,R2=0.9997,线性范围为:0.1~100μmol·L-1,检测限为:0.015μmol·L-1,回收率为:95.45%,因此,成功建立了使用RP-HPLC来测定瘤胃液和血液中组胺的方法。试验Ⅱ、日粮精粗比对奶山羊瘤胃液内pH值和组胺生成的影响采用装有瘤胃瘘的4只奶山羊随机分为两组,每组2只进行交叉试验,分别饲喂日粮精粗比为4:6和6:4等能等氮的饲料,每周期为3周,共2期,分别在第21天通过瘤胃瘘管采集采食前和采食后第2、4、6和8小时的瘤胃液。结果显示:(1)饲喂日粮精粗比为6:4的奶山羊瘤胃内pH值低于饲喂日粮精粗比为4:6下的pH值,并且在高精料日粮下其体内pH值的下降速率和幅度都大于低精料日粮。(2)在高精料日粮下瘤胃内pH值低于6.0持续了6个小时,提示奶山羊发生了SARA。(3)在高精料日粮下,瘤胃内组胺含量升高,并且差异极其显著(P<0.01)。试验Ⅲ、日粮精粗比对组胺在奶山羊肝脏中代谢的影响采用装有门静脉和肝静脉插管的4只奶山羊随机分为两组,每组2只进行交叉试验,饲喂周期及采样时间同试验Ⅱ,结果显示:(1)在高精料日粮条件下静脉血液内组胺浓度有升高的趋势,说明高精料日粮增加了血液中组胺的含量。(2)不同日粮下门静脉中的组胺浓度高于肝静脉中的组胺浓度,且差异显著(P<0.05),这说明肝脏对组胺有清除作用。(3)在高精料日粮条件下肝脏对组胺的清除率升高,但差异不显著。试验Ⅳ、日粮精粗比对肝脏中组胺受体mRNA表达的影响采用6只奶山羊随机分为两组,每组3只进行交叉试验,饲喂周期及采样时间同试验Ⅱ,结果显示:(1)在奶山羊肝脏中,组胺H1受体可能在肝脏内起主要作用。(2)高精料日粮条件下组胺H1受体的表达量有升高的趋势。综上表明,在我国目前反刍动物日粮水平条件下,饲喂大量高精料日粮瘤胃内组胺含量显著升高,血液中组胺含量也有升高的趋势,组胺H1受体的表达量升高,肝脏对组胺的清除率升高但是不显著。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略语及符号
  • 引言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 组胺的来源及生理功能
  • 1 组胺的来源
  • 2 组胺的国家标准
  • 3 组胺的结构
  • 4 组胺的生物学功能
  • 第二章 组胺与亚急性瘤胃酸中毒
  • 1 组胺对反刍动物的影响
  • 1.1 组胺在反刍动物体内代谢及影响因素
  • 1.2 组胺引起的疾病
  • 1.2.1 蹄叶炎
  • 1.2.2 子宫内膜炎
  • 1.2.3 乳房炎
  • 2 SARA对反刍动物的影响
  • 2.1 SARA定义
  • 2.2 SARA发病机理
  • 2.3 SARA判定的标准
  • 2.4 SARA对奶牛的影响
  • 2.5 SARA的调控措施
  • 第三章 组胺及组胺受体分析方法
  • 1 组胺测定方法
  • 1.1 紫外分光光度法
  • 1.2 荧光分光光度法
  • 1.3 酶联免疫法
  • 1.4 电化学分析法
  • 1.5 高效液相色谱
  • 2 组胺受体mRNA水平表达量的测定
  • 参考文献
  • 第二篇 试验研究
  • 第一章 RP-HPLC测定瘤胃液血液中组胺含量
  • 1 实验试剂和仪器
  • 1.1 实验试剂
  • 1.2 实验仪器
  • 2 实验步骤
  • 2.1 标准溶液的制备
  • 2.2 样品处理
  • 2.3 标准溶液和样品的衍生
  • 2.4 色谱条件
  • 2.5 样品测定
  • 3 结果
  • 3.1 回归方程、重复性、线性范围及检测限
  • 3.2 样品的测定及回收率试验
  • 3.2.1 组胺标准品和样品色谱图
  • 3.2.2 样品回收率试验
  • 4 结论
  • 第二章 日粮精粗比对奶山羊瘤胃液内pH值和组胺生成的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 试验动物和饲养管理
  • 1.2 试验日粮
  • 1.3 试验模型的建立
  • 1.4 试验设计
  • 1.5 瘤胃液采集和pH值测定
  • 2 瘤胃液PH值
  • 2.1 数据统计分析
  • 2.2 结果与讨论
  • 3 瘤胃液内组胺含量变化
  • 3.1 组胺的测定方法
  • 3.2 数据统计分析
  • 3.3 结果与讨论
  • 4 小结
  • 第三章 日粮精粗比对组胺在奶山羊肝脏内代谢的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 试验动物和饲养管理
  • 1.2 试验日粮
  • 1.3 试验模型的建立
  • 1.4 试验设计
  • 1.5 血液采集
  • 2 血液中组胺含量
  • 2.1 不同日粮下奶山羊静脉血液中组胺含量
  • 2.1.1 数据统计分析
  • 2.1.2 结果与讨论
  • 2.2 不同日粮下奶山羊门静脉血液中组胺含量
  • 2.2.1 数据统计分析
  • 2.2.2 结果与讨论
  • 2.3 不同日粮下奶山羊门静脉和肝静脉血液中组胺含量对比
  • 2.3.1 数据统计分析
  • 2.3.2 结果与讨论
  • 2.4 日粮精粗比对组胺在奶山羊肝脏内代谢的影响
  • 2.4.1 数据统计分析
  • 2.4.2 结果与讨论
  • 3 小结
  • 第四章 日粮精粗比对奶山羊肝脏中组胺受体mRNA表达的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 试验动物和饲养管理
  • 1.2 试验日粮
  • 1.3 试验设计
  • 1.4 实验仪器
  • 1.5 试验方法
  • 1.5.1 肝脏中总RNA的提取
  • 1.5.2 引物设计
  • 1.5.3 验证RNA是否有DNA污染
  • 1.5.4 cDNA的合成
  • 1.5.5 qRT-PCR
  • 1.5.6 qRT-PCR结果分析
  • 2 结果与分析
  • 2.1 数据统计分析
  • 2.2 结果与讨论
  • 3. 小结
  • 参考文献
  • 全文总结
  • 致谢
  • 相关论文文献

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