论文摘要
近年来随着人民生活水平的提高，家庭和办公用房的室内装潢已必不可少，人们在追求美好生活的同时，却被装潢材料中的有害物质困扰。装潢材料中常有少量甲醛未被化合，可从装潢材料中逐渐释放出来污染室内空气，对人体产生危害[1.2]。甲醛以其来源广，毒性大，污染水平高，污染时间长等特点，已经成为我国最主要的室内空气污染物之一，也是世界环境卫生领域的热点和难点。探讨甲醛的遗传毒性，毒性机制等，对全面和系统的了解甲醛的遗传毒性的致癌性，进一步评价和改善室内空气质量具有十分重要的意义，并为制定安全的环境和职业浓度提供更科学的依据。本文采用SDS-KCL沉淀法、PCR、RT-PCR等技术，origin，gene-tool等生物信息学软件分析手段，选用体外培养的HEK293细胞及Hela细胞为材料，对甲醛导致DPC及DPC的毒作用机制进行了系统研究。主要包括以下几方面：1．甲醛导致DNA-蛋白质交联效应DNA-蛋白质交联（DNA-protein crosslinks，DPC）在正常细胞内有一定的背景值，行使一定的生物学功能，是DNA与核蛋白的正常联系或其代谢结果，当生物大分子受到外来环境污染物或化学致癌物（如甲醛）作用时，则可诱导出超量的DPC，且DPC仅发生在单链上，这表明这种交联只能发生在DNA复制和转录期间，因此，形成DPC对DNA的构象和功能（复制和转录）都会产生影响，又因与其他损伤相比较难修复，因此在DNA复制与转录时容易造成一些重要基因（如抑癌基因）的丢失。本研究以体外培养的HEK293细胞为材料，设置不同浓度，采用SDS-KCL沉淀法对甲醛致DPC效应进行了探讨，实验结果显示：液态甲醛在低浓度（62.5umol/L，125umol/L）时，DPC含量与对照组没有极显著性差异，当液态甲醛在高浓度（250umol/L，500umol/L，1000umol/L，2000umol/L）时，DPC含量与对照组有极显著性差异（P＜0.01），因此，以大于或等于250umol/L作为后续实验的染毒浓度。2．DPC对复制的影响自1969年Brutlag首次报导甲醛可诱导DPC以来，关于DPC的研究大量都集中在对其生化特性，修复机制及其与甲醛的剂量效应上，而关于其作为生物标志物所产生的长期生物效应的研究却很少，有报道用基因芯片技术检测出甲醛染毒后P344大鼠鼻呼吸道上皮细胞基因表达异常，其中，Rab26基因与CDKN2B基因表达量下调。本研究分别选HEK293细胞中的Rab26基因与Hela细胞中的CDKN2B基因，染毒后通过PCR技术体外扩增，结果显示：伴随甲醛浓度增大，DPC含量升高Rab26基因扩增量下降，CDKN2B基因扩增量无显著性变化。3．DPC对转录的影响本研究分别以HEK293细胞中的Rab26基因与Hela细胞中的CDKN2B基因为目的基因，染毒后通过RT-PCR技术检测其在转录水平的影响，结果显示：伴随甲醛浓度的增大，DPC含量升高Rab26基因与CDKN2B基因转录下调。
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