论文摘要
目的:观察姜黄素对脂肪变性人肝HL-7702细胞甘油三酯沉积及乙酰CoA羧化酶（ACC）mRNA表达的影响。方法:采用随机对照研究,以离体人肝HL-7702细胞为研究对象。用10%（V/V）医用脂肪乳注射液和10%（V/V）胎牛血清的RPMI-1640完全培养基孵育人肝HL-7702细胞24小时,制备肝细胞脂肪变性模型。实验分为6组:第1组为空白对照,即正常肝细胞组;第2组为脂变肝细胞组;第3组至第6组在脂变细胞中分别加入不等量姜黄素,使姜黄素终浓度分别为12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L。每组加药后继续孵育24小时。油红O染色观察每组细胞形态和细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法检测每组肝细胞乙酰CoA羧化酶mRNA水平的表达。根据姜黄素改善细胞内甘油三酯含量的情况,作出量效关系。然后以姜黄素100μmol/L浓度分别孵育模型组细胞6h,12h,24h,48h,使用上述观察方法,确定姜黄素改善细胞脂肪变性的最佳时间,作出时效关系。实验数据以x±s表示,用SPSS10.0统计软件对数据进行分析,以P<0.05作为差异显著性标准。结果:用10%脂肪乳注射液孵育人肝HL-7702细胞24小时后,油红O染色后倒置显微镜下可观察到HL-7702细胞脂肪变性,胞浆内充满大量被油红O红染的脂滴,且高效液相色谱法检测细胞内甘油三酯含量明显增加（P<0.01）,示脂变肝细胞模型成功建立。加入不同浓度的姜黄素（12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）处理24小时后,油红O染色见细胞内脂滴较处理前减少,脂肪化程度减轻,高效液相色谱显示细胞内甘油三酯减少,与姜黄素呈剂量依赖性关系。RT-PCR显示肝细胞脂肪变性后ACC的mRNA表达增强,加入姜黄素处理后ACC的mRNA表达减弱,亦与姜黄素呈剂量依赖性关系。以姜黄素100μmol/L浓度为处理浓度,与脂变肝细胞共同孵育6,12,24小时,结果显示:细胞内脂滴呈时间依赖性减少;姜黄素呈时间依赖性的降低脂变肝细胞内甘油三酯含量,同时呈时间依赖性的减少ACCmRNA的表达。但超过24小时后,再延长处理时间,细胞内甘油三酯含量值无明显减少,ACCmRNA的表达亦无显著性差异。结论:1.姜黄素能使肝细胞脂肪化程度减轻,减少肝细胞甘油三酯的沉积。2.姜黄素能减少肝细胞甘油三酯的沉积,可能与抑制ACCmRNA的表达而减少脂肪酸的合成有关。