NINJ2基因位点多态性与缺血性脑卒中的关联研究

论文摘要

研究背景缺血性脑卒中（Ischemic stroke）,指突然发生的脑组织局部供血动脉血流灌注减少或血流完全中断,停止供血、供氧、供糖等,使该局部脑组织崩解破坏；是由多种环境因素及多种基因相互作用导致的一种多因子疾病,具有发病率高、死亡率高、致残率高、复发率高、并发症多等特点。在中国,约3/4的脑卒中是缺血性脑卒中。世界卫生组织调查结果显示,中国脑卒中发病率排名世界第一。近二十年来,中国的脑血管疾病发病率呈直线上升趋势,高达109.7～217/10万,脑血管病已成为第三位全国居民死亡原因。脑卒中是是严重危害人类健康的主要公共卫生问题之一,不仅严重危害群众健康,也造成了沉重的社会负担；探讨其发病机制、寻找病因及有效的防治措施,已成为一项紧迫的任务。缺血性脑卒中是受遗传因素与环境因素共同作用的多因子疾病,目前已经发现了很多环境危险因素,如吸烟、饮酒过量、高血压、糖尿病、血脂异常以及超重肥胖等；同时,遗传易感基因的研究也取得了很大进展,目前已经发现的与脑卒中相关的基因有：肾素血管紧张素系统相关基因、脂代谢相关基因,凝血/纤溶系统相关基因等。近期的一项全基因组关联研究发现了与缺血性脑卒中相关联的新的基因位点：人类染色体12p13的rs1242579、rs11833579位点,且rs12425791位点在两个研究人群（北美黑人和荷兰白人）中得到验证。这两个点位于NINJ2基因的旁侧,而且均与NINJ2基因存在强的连锁不平衡。尽管NINJ2基因的功能尚不清楚,但极有可能是脑卒中的易感基因。因此,本研究以北京市朝阳医院的缺血性脑卒中病人为研究对象,从Hapmap公布的数据中挑选符合要求的标签SNP,用少量的标签SNP覆盖比较大的基因区段,探讨NINJ2遗传多态性与缺血性脑卒中的关系。研究目的1探讨NINJ2基因的标签SNP多态性与缺血性脑卒中的关系,寻找可能致病基因；2探讨NINJ2基因的标签SNP多态性与缺血性脑卒中相关危险因素的关系,寻找可能间接致病基因；3识别基因--环境相互作用,为有效预防缺血性脑卒中提供依据；4提供汉族NINJ2基因各SNP位点频率数据,为其他民族脑卒中流行病学研究提供可比较的基线数据,为缺血性脑卒中的进一步研究提供线索。材料与方法采用以医院为基础的病例对照研究,选定NINJ2基因的8个标签SNP进行关联分析。病例组为自2007年4月至2009年11月期间,在朝阳医院神经内科住院治疗的首次发病的非致死性缺血性脑卒中病人。诊断标准：所有病例均按中华神经科学会第四届全国脑血管病学术会议修订的《各类脑血管疾病诊断要点（1995）》作为诊断标准,由有丰富临床经验的神经内科医师根据临床神经功能缺损表现和头部CT、MRI、以及颈动脉B超检查确诊。排除标准：排除血液病、肿瘤、脑血管畸形或动脉瘤、自身免疫性疾病等引起的继发性脑卒中患者。对照组选同时期在该院普外科、泌尿外科、肝胆外科、骨科、口腔科、眼科及耳鼻喉科的符合标准的住院病人。排除标准：排除血液病、肿瘤、脑血管畸形或动脉瘤、自身免疫性疾病以及脑卒中病史者。所有研究对象均为无血缘关系的汉族人群。抽取血样,ACD抗凝,应用酚-氯仿法抽提基因组DNA,应用美国应用生物系统公司（上海）的Taqman技术平台,对所有选定的SNP进行基因分型；确定各位点的遗传模型后,采用多元Logistic回归分析各位点以及其他因素对缺血性脑卒中的作用,并应用Haploview4.2软件进行推断,以期发现有意义的单倍型；通过分层分析、Logistic回归分析,并结合单纯病例研究方法,分析遗传多态性与环境之间交互作用对缺血性脑卒中发病的影响。研究结果病例组的年龄、BMI、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、空腹血糖均比对照组高,且吸烟率、饮酒率、高血压、糖尿病及高脂血症患病率均高于对照组；常见危险因素对缺血性脑卒中的危险性（OR）由高到低依次为：高血压（OR=9.872（7.671,12.706））、吸烟（OR=2.165（1.632,2.873））、糖尿病（OR=2.052（1.531,2.752））、饮酒（OR=1.940（1.376,2.737））、年龄（OR=1.808（1.399,2.337））及高脂血症（OR=1.452 （1.115,1.892））。NINJ2基因的各标签SNP位点均符合哈德温伯格平衡。rs10849373位点的基因型频率等位基因频率在病例对照组有显著性差异。Logistic回归分析发现,在显性模型下,相对于GG基因型携带者,AA/GA基因型携带者发生缺血性脑卒中的危险性是1.384 （1.067,1.795）, AA、GA基因型携带者其危险性分别为1.902 （1.056,3.428）、1.316 （1.002,1.729）; rs10849373位点TT+CT基因型与高脂血症有正相关性（OR=1.270 （1.023,1.578））, rs2535393位点TT+CT基因型与甘油三酯具有负相关性（OR=0.269 （0.081,0.893））, rs11063794位点AA+GA基因型是糖尿病的保护性因素（OR=0.786 （0.623,0.991））。单倍型研究未发现与缺血性脑卒中有关的单倍型。吸烟与rs10849373之间存在交互作用（p<0.0001,OR=3.101）,吸烟可以促进rs10849373诱导缺血性脑卒中的发生,并且可使危险性增加一倍。另外,单纯病例研究显示：饮酒可能与rs10849373存在交互作用（p=0.0340, OR=1.434 （1.028,2.002））; rs2535398 （OR=0.286）、rs2245918 （OR=0.205）与rs10849373呈现负交互作用（p均小于0.0001）,即rs2535398、rs2245918可以减弱rs10849373诱发缺血性脑卒中的危险；而rs11063806 （p<0.0001, OR=2.727）、rs2607926 （p=0.0033,OR=1.710）与rs10849373呈现正交互作用,即rs11063806、rs2607926可以增加rs10849373诱发缺血性脑卒中的危险。结论NINJ2基因中rs10849373位点与缺血性脑卒中存在显著性关联,该位点还与高脂血症有相关性；rs2535393、rs11063794分别与甘油三酯、糖尿病有明显关联。Rs10849373位点与吸烟存在显著正交互作用,二者相互作用促进缺血性脑卒中发生；rs10849373与rs2535398、rs2245918可能存在负交互作用,与rs11063806、rs2607926可能存在正交互作用。NINJ2基因极有可能是缺血性脑卒中的易感基因。

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