鞭毛蛋白分离纯化及其在脓毒症肺损伤中作用的初步探讨

论文摘要

本实验通过酸裂解的方法从甲型副伤寒沙门氏菌分离出粗制鞭毛蛋白,并经除盐、弱阴离子交换,获得纯化的鞭毛蛋白。用其免疫大鼠,约7-8 周后获得高效价的抗血清。然后通过盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture,CLP）的方法复制大鼠脓毒症急性肺损伤（acute lung injure, ALI）模型,观察ALI 发病过程中①血清和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid ,BALF）中鞭毛蛋白含量的变化;②动脉血氧分压（partial pressure of oxygen in artery,PaO2 ）的变化;③肺湿干比值（wet/dry ratio ,W/D）的变化;④鞭毛蛋白含量与PaO2 和W/D 比值的相关性;⑤血清和BALF 中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）含量的变化。并采用脓毒症ALI 模型,观察早期应用自制的鞭毛蛋白抗血清后①PaO2 和W/D比值的变化;②血清和BALF 中TNF-α和IL-1β含量的变化。结果显示:（1）纯化的鞭毛蛋白经SDS 检测,分子量约为52kD。（2）纯化的鞭毛蛋白经Western Blot 检测,在52kD 处见到清楚的蛋白条带,磷钨酸负染扫描电镜观察到蛋白呈细丝状。（3）双向免疫扩散法检测到鞭毛蛋白抗血清效价为1:64,该血清经Western Blot 检测,有蛋白条带位于52kD 处。（4）采用盲肠结扎穿孔的方法,可成功地复制大鼠脓毒症肺损伤模型（致伤组）。在致伤过程中,①血清和BALF 中鞭毛蛋白含量逐渐升高,6h 后血清中鞭毛蛋白含量显著高于对照组（P<0.01）,12h 后BALF 中鞭毛蛋白含量显著高于对照组（P<0.01）; ②PaO2 逐渐下降,12h 后显著低于对照组（P<0.01）;③W/D 比值逐渐升高,12h 后显著高于对照组（P<0.01）;④血清和BALF 中鞭毛蛋白含量变化与PaO2变化呈负相关（相关系数r 分别为-0.939、-0.931,P<0.01）,血清和BALF 中鞭毛蛋白含量与肺W/D 比值变化呈正相关（相关系数r 分别为0.935、0.920,P<0.01）;⑤血清和BALF 中TNF-α和IL-1β含量逐渐升高, 6h 后TNF-α含量显著高于对照组（P<0.01）, 12h 后IL-1β含量显著高于对照组（P<0.01）;⑥组织病理学改变:大体观察,致伤组12h 后可见肺脏肿胀,表面有广泛大小不等的暗红色斑片状病灶,切面可见淡红色或白色泡沫状液体溢出;光镜观察, 12h 后可见灶性肺间

论文目录

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• 论文正文 鞭毛蛋白分离纯化及其在脓毒症肺损伤中作用的初步探讨
• 前言
• 第一部分 鞭毛蛋白的提取与鉴定
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 鞭毛蛋白抗血清的制备
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 鞭毛蛋白在脓毒症性肺损伤中作用的初步探讨
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 图片
• 参考文献
• 文献综述 鞭毛蛋白诱导急性肺损伤的研究进展
• 参考文献
• 研究生期间发表的文章