大鼠撞击伤后血—脊髓屏障的研究

论文摘要

脊髓损伤（spinal cord injury, SCI）常导致悲惨后果,造成社会、家庭的巨大痛苦和沉重负担,但对其病理变化机制和修复过程的研究却是长期困扰临床的难题,同时也成为了学者关心的热点。脊髓受到外源性机械力破坏后,不仅破坏脊髓的实质,包括损伤区的细胞以及轴突,同时破坏了血管结构,损伤内皮细胞,破坏血脊髓屏障（blood-spinal cord barrier, BSCB）。这造成脊髓组织的水肿、缺血缺氧、并且血浆内的各种分子无选择性的进入脊髓实质内部,产生一系列继发性损伤作用,加重脊髓的损伤。继发性损伤的过程不仅造成,而且脊髓内BSCB破坏范围也随之扩大,进一步所以对于SCI后BSCB通透性变化显得十分重要。血-脑（脊髓）屏障损伤范围的观察方法多为注射外源性示踪剂,我们曾在实验中采用血浆内源性免疫球蛋白G（IgG）作为示踪剂,观察高血压模型BSCB开放情况,取得很好的效果。本研究分为两部分:第一部分用外源性IgG为示踪剂,观察脊髓损伤后不同时间点BSCB破坏范围,显示BSCB在脊髓损伤后的变化规律。第二部分利在脊髓损伤后不同时间点静脉内注射分子量、生化性质与大鼠IgG相近的外源性兔IgG为示踪剂并与内源性IgG分布范围进行比较。第一部分在大鼠脊髓撞击伤模型中以静脉注射的兔IgG为外源性示踪剂,用免疫荧光显示其在脊髓内的分布,用图像阈值分割技术处理图像后,借此显示BSCB通透性的变化,分析了损伤后不同时间点（0 h、1 d、3 d、5 d、7 d）BSCB开放的范围,长度（mm）分别为:5.84±0.60、8.33±0.47、9.50±0.44、4.48±0.23、0.00±0.00;面积（mm2）本别为:6.24±1.00、5.73±0.37、7.17±0.15、0.75±0.06、0.00±0.00,清晰的显示了SCI后BSCB开放的范围。实验说明,BSCB在脊髓撞击损伤后,早期会受到多种有害因素影响而发生继发性损伤,损伤后3 d时BSCB损伤范围达到最大,随后随着各种有害因素的清除以及恢复能力的加强,BSCB损伤范围逐渐缩小,7 d时外源性IgG已经无法通过损伤区内的微血管系统,说明BSCB已经得以完全恢复。第二部分我们利用免疫双标的方法显示大鼠内源性IgG与注射入血的外源性兔IgG在脊髓内的分布,观察内源性IgG能否示现BSCB破坏范围。比较发现,两者在SCI后分布的时程与分布范围上有明显的不同。时程上外源性兔IgG在脊髓内7 d时即不存在,而大鼠内源性IgG直到14 d才被清除;分布上在损伤早期（3 d内）内源性大鼠自身IgG在损伤中央区的分布范围明显大于外源性兔IgG,其后（3 d后）内源性大鼠自身IgG在整个损伤区的分布范围均大于外源性兔IgG。说明在血-脊髓屏障已恢复的部位仍有残留的内源性IgG ,因此,内源性IgG不能反映伤后一段时间后的脊髓屏障的变化,而外源性IgG可精确地反映注射当时血-脊髓屏障的改变。内源性IgG成份在损伤区内残留是否或如何参与脊髓损伤病理过程尚需进一步研究。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 第一部分机械性脊髓损伤型模型
• 1. 脊髓撞击伤模型
• 2. 脊髓挤压伤模型
• 3. 脊髓切割伤模型
• 第二部分脊髓损伤机制
• 1. 原发性损伤
• 2. 继发性损伤
• 第三部分血管与脊髓损伤
• 1. 脊髓血供
• 2. 脊髓损伤后的血流变化
• 3. BSCB 的结构
• 4. BSCB 的功能
• 5. 血管与脊髓继发性损伤后变化
• 6. 血管变化与继发性损伤机制
• 正文大鼠脊髓撞击伤后BSCB 破坏范围的研究
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 兔IgG 制备
• 2 方法
• 2.1 大鼠脊髓撞击伤模型制备
• 2.2 组织准备
• 2.3 荧光免疫组织化学染色
• 2.4 定量分析和统计处理
• 3 结果
• 3.1 免疫组织化学染色
• 3.2 统计分析
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢