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寿胎丸对小鼠自然流产模型妊娠结局的影响及相关分子机制

2020-12-07阅读(778)

寿胎丸对小鼠自然流产模型妊娠结局的影响及相关分子机制

论文摘要

目的：通过研究小鼠母胎界面SOCS 1,SOCS2,SOCS3mRNA的表达及Th1/Th2型细胞因子与反复自然流产的关系及寿胎丸对自然流产模型母-胎界面SOCS1,SOCS3mRNA的表达和Th 1/Th2型细胞因子表达及平衡的调控,并通过用体外培养的方法,进一步了解寿胎丸的调控不同SOCS基因表达及影响Th1/Th2的偏移的免疫调节作用,探讨寿胎丸在诱导母一胎免疫耐受中的作用机制。方法：1.CBA/J×BALB/c建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立反复自然流产模型,将自然流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠按怀孕先后顺序随机分为四组,分别为模型组,寿胎丸低、中、高剂量组,从妊娠第一天开始给药,孕14天后处死孕鼠,计算各组胚胎吸收率,RT-PCR测定各组母-胎界面SOCS1和SOCS3的转录水平,ELISA检测蜕膜及胎盘组织共培养上清细胞因子IL-4,IL-10,IFN-y,TNF-a的含量,以IL-4／IFN-γ、IL-10／TNF-α衡量免疫平衡的指标。2.以非孕期BALB/c雌鼠脾细胞来源CD4+T细胞为反应细胞,以OVA为,抗原灭活处理的DBA/2雄鼠脾细胞APC为抗原呈递细胞,加入IL-2和IL-12细胞因子共培养,诱导制备CD4+T细胞Th1偏移模型。用寿胎丸含药血清在低中高剂量和最有效剂量在Oh,1h,2h,4h,8h分别对CD4+T细胞Th1偏移模型进行体外诱导其分化,分别采RT-PCR测定细胞模型的SOCS1和SOCS3的转录水平;ELISA测定细胞培养上清液IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-α的分泌水平,以IL-4／IFN-γ、IL-10／TNF-α衡量免疫平衡的指标.结果：模型组的胚胎吸收率模型高于正常妊娠组,与模型组比较,寿胎丸低剂量未能显著改善自然流产模型孕鼠的胚胎吸收率（P>0.05）寿胎丸中高剂量组孕鼠的胚胎吸收率均显著下降,与正常妊娠组比较无明显差异（P>0.05）。模型组母胎界面IFN-γ、TNF-α表达显著高于正常妊娠组（P<0.05）,IL-4、IL-10表达、IL-4／IFN-γ、IL-10／TNF-α比值显著低于正常妊娠组（P<0.05）。与模型组相比,寿胎九低中高剂量组均能使孕鼠母胎界面TNF-a和IFN-γ的表达显著下降（P<0.05）,寿胎丸中高剂量组能使母胎界面IL-4、IL-10的表达显著增加（P<0.05）；与正常妊娠组比较,孕鼠母-胎界面IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-a.的表达水平无显著性差异（P>0.05）；寿胎丸低中高剂量组使Th1/Th2平衡的平衡朝Th2偏移,其中中高剂量组与正常组无明显差异（P>0.05）. SOCS1、SOCS2、SOCS3mRNA在模型组及正常妊娠组蜕膜和胎盘组织均有表达,但与正常妊娠组比较,SOCS1mRNA在模型组升高,而SOCS3mRNA表达降低,SOCS2mRNA表达无明显差异,寿胎丸低中高剂量组能够下调模型组孕鼠母胎界面的SOCS1mRNA的表达,寿胎丸中高剂量组升调模型组孕鼠SOCS3mRNA的表达（P<0.05）。寿胎丸低中高剂量组SOCS1mRNA的表达与正常妊娠组无明显差异,寿胎丸中高剂量组的SOCS3mRNA的表达与正常妊娠组无明显差异（P>0.05）。寿胎丸中剂量和高剂量药物血清可显著降低Thl偏移模型的CD4+T细胞SOCS1mRNA,TNF-α、IFN-γ的表达（P<0.05）,同时高剂量药物血清还可显著提高其SOCS3mRNA, IL-4,IL-10表达水平（P<0.05）；寿胎丸高剂量药物血清分别作用2、4、8h均可显著降低SOCS1mRNA,TNF-α、IFN-γ的表达（P<0.05）,作用4h时达到最小值,高剂量药物血清分别作用2、4h可显著提高SOCS3mRNA, IL-4,IL-10表达水平（P<0.05）,作用4h时达到最大值。结论：正常妊娠组母胎界面局部均呈现明显的Th2型免疫偏倚。而模型组呈现明显的Th1型免疫偏倚。母胎界面Thl/Th2型细胞因子表达调节失衡是导致流产的重要原因之一。SOCS1、SOCS3可能在调节Th1/Th2型平衡中发挥重要作用。寿胎丸可能通过降低母胎界面SOCS1的表达水平,升高母胎界面SOCS3的表达水平,恢复母—胎界面局部Th1型／Th2型细胞因子表达的生理平衡,形成维持正常妊娠所需的Th2型免疫偏离,诱导母—胎免疫耐受,从而降低胚胎吸收率,维持妊娠。

论文目录

  • 英文缩略词表
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 引言
  • 第一部分 :小鼠母胎界面SOCS1,2,3基因的表达与流产的关系
  • 1. 材料和方法
  • 1.1 实验动物
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 1.4 主要试剂的配制
  • 1.5 引物的设计与合成
  • 1.6 造模及分组
  • 1.7 观察指标
  • 1.7.1 观察两组的胚胎丢失率
  • 1.7.2 ELISA测定母—胎界面细胞培养上清液的Th1型/Th2型细胞因子表达水平
  • 1.7.3 RT-PCR测定母—胎界面SOCS1,SOCS2,SOCS3mRNA表达水平
  • 1.8 统计方法
  • 2. 结果
  • 2.1 两组孕鼠胚胎吸收率比较
  • 2.2 两组孕鼠母胎界面Th1/Th2型细胞因子表达水平比较
  • 2.3 两组孕鼠母胎界面Th1/Th2型免疫调节平衡指标（IL-4/IFN—γ、IL-10/TNF-α）的比较
  • 2.4 SOCS1,SOCS2,SOCS3mRNA在正常妊娠和模型组的表达差异
  • 第二部分:寿胎丸对小鼠自然流产模型母胎界面SOCS1,SOCS3基因的表达及Th1/Th2细胞因子平衡调控和妊娠结局的影响
  • 1. 材料与方法
  • 1.1 实验动物
  • 1.2 实验药物
  • 1.3 主要试剂
  • 1.4 主要仪器
  • 1.5 主要试剂的配制
  • 1.6 引物的设计与合成
  • 1.7 造模
  • 1.8 分组和给药方法
  • 1.9 观察指标
  • 1.10 统计方法
  • 2. 结果
  • 2.1 寿胎丸对小鼠自然流产模型妊娠预后的影响
  • 2.2 寿胎丸对自然流产模型母胎界面Th1/Th2型细胞因子表达的影响
  • 2.3 寿胎丸对自然流产模型母胎界面Th1/Th2型免疫平衡的影响
  • 2.4 寿胎丸对自然流产模型母胎界面SOCS1,SOCS3mRNA表达的影响
  • +T细胞Th1偏移模型SOCS1及SOCS3mRNA的表达及Th细胞因子分泌的影响'>第三部分:寿胎丸对体外培养CD4+T细胞Th1偏移模型SOCS1及SOCS3mRNA的表达及Th细胞因子分泌的影响
  • 1.材料和方法
  • 1.1 动物
  • 1.2 主要药物及试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 1.4 主要试剂的配制
  • 1.5 造模
  • 1.6 脾脏单细胞悬液的制备
  • +T细胞'>1.7 免疫磁珠分离CD4+T细胞
  • 1.8 抗原呈递细胞的制备
  • 1.9 台盼蓝染色计数及测活力
  • +T细胞Thl偏移模型的建立'>1.10 CD4+T细胞Thl偏移模型的建立
  • 1.11 药物血清制备
  • +T细胞的抑制率（IR）'>1.12 MTT法确定药物血清对CD4+T细胞的抑制率（IR）
  • 1.13 分组及给药
  • 1.14 观察指标
  • 1.15 统计方法
  • 2. 结果
  • +T细胞Thl偏移模型SOCS1和SOCS3mRNA表达的影响'>2.1 不同浓度寿胎丸药物血清对CD4+T细胞Thl偏移模型SOCS1和SOCS3mRNA表达的影响
  • 2.2 寿胎丸高剂量药物血清不同时相对CD4+T细胞SOCS1和SOCS3mRNA表达的影响
  • +T细胞Th1偏移模型细胞因子表达的影响'>2.3 寿胎丸含药血清对小鼠CD4+T细胞Th1偏移模型细胞因子表达的影响
  • +T细胞细胞因子表达的影响'>2.4 寿胎丸高剂量药物血清不同时相对CD4+T细胞细胞因子表达的影响
  • +T细胞Th1偏移模型Th1/Th2型免疫平衡的影响'>2.5 不同剂量寿胎丸含药血清对CD4+T细胞Th1偏移模型Th1/Th2型免疫平衡的影响
  • +T细胞Th1偏移模型Th1/Th2型免疫平衡的影响'>2.6 高剂量寿胎丸含药血清不同时相对CD4+T细胞Th1偏移模型Th1/Th2型免疫平衡的影响
  • 第四部分 讨论与分析
  • 1.关于模型的选择
  • 2.中医对反复自然流产的认识及补肾机理
  • 3.寿胎丸的理法方药分析及相关研究
  • 4.影响Th1/Th2的分化因素及Th/Th2失衡与妊娠的关系
  • 4.1 两个信号的激活
  • 4.2 参与Th1/Th2分化的主要细胞因子
  • 4.3 Th1/Th2失衡与妊娠的关系
  • 5. SOCS的生物学机制及对Th1/Th2平衡的调控和妊娠结局的影响
  • 5.1 SOCS负调控机制
  • 5.2.SOCS对Th1/Th2平衡的调控及妊娠结局影响
  • 5.2.1 SOCS对Th1/Th2平衡的调控
  • 5.2.2 SOCS对妊娠结局的影响
  • 6.寿胎丸对母胎免疫耐受的调节作用
  • 7.展望
  • 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录
  • 攻读博士期间发表论文

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