论文摘要
冠心Ⅱ号是根据中医活血化瘀原理,由丹参、川芎、赤芍、红花、降香五味药组成,具有活血化瘀和理气止痛等功能,用于治疗心脑血管疾病。临床观察证实冠心Ⅱ号可增加病人的冠脉循环指数,改善冠脉供血不足且疗效稳定。实验研究证实冠心Ⅱ号对心脏功能、心肌缺血、心肌细胞损伤以及血小板聚集、血栓形成等,具有多方面的药理作用。本论文通过建立大鼠急性心肌梗塞模型和大鼠心肌缺血-再灌注模型,对冠心Ⅱ号对心肌缺血损伤的作用及其机制进行了研究。1冠心Ⅱ号对大鼠急性心肌梗塞的保护作用目的:观察冠心Ⅱ号对大鼠急性心肌梗塞的心肌酶、心肌损伤程度、心肌细胞凋亡及心肌自由基的影响,探讨冠心Ⅱ号对急性心肌缺血的作用及其机制。方法:大鼠随机分为冠心Ⅱ号组、假手术对照组及模型对照组,连续给大鼠灌胃冠心Ⅱ号标准汤剂10g生药·kg-1或等剂量生理盐水7d,采用结扎左冠状动脉前降支（LAD）法建立大鼠急性心肌梗塞模型,24h后取血液和心肌标本。（1）用比色法测定血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）水平。（2）光镜观察心肌组织病理损伤程度。（3）电镜观察心肌超微结构。（4）应用TUNEL法观察大鼠心肌缺血区的心肌细胞凋亡情况。（5）比色法测定心肌组织丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷光甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的活性。结果:（1）与假手术对照组比较,模型对照组大鼠血清中LDH、AST、CK、及CK-MB的含量明显增加;冠心Ⅱ号组大鼠血清中LDH、AST、CK、及CK-MB的含量较模型对照组下降。（2）光镜观察,模型对照组大鼠心肌纤维排列紊乱、间质高度水肿,心肌细胞溶解性坏死、有大量炎细胞浸润;与模型对照组比较,冠心Ⅱ号组大鼠心肌损伤明显减轻,心肌病理损伤分级低于模型对照组;（3）电镜观察,模型对照组大鼠心肌肌丝排列紊乱,线粒体普遍肿胀,嵴变疏短,排列不规则,部分线粒体可见嵴溶解消失;冠心Ⅱ号组与模型对照组比较,大鼠心肌和线粒体结构显著改观。（4）冠心Ⅱ号组和模型对照组大鼠心肌缺血区细胞凋亡数均高于假手术对照组,但冠心Ⅱ号组心肌细胞凋亡细胞数低于模型对照组。（5）与假手术对照组比较,模型对照组大鼠心肌MDA含量增加,而GSH-PX、SOD的活性均降低;与模型对照组比较,冠心Ⅱ号组大鼠心肌MDA含量降低,而心肌SOD及GSH-PX的活性提高。结论:冠心Ⅱ号可降低急性心肌梗塞大鼠血清LDH、AST、CK及CK-MB的活力,减轻缺血心肌的变性坏死反应、减少炎性细胞浸润损伤和减轻缺血心肌线粒体的损伤,对急性心肌缺血损伤有保护作用;冠心Ⅱ号对急性心肌缺血损伤的保护作用,可能与其减轻心肌细胞凋亡、提高机体抗氧化能力和保护心肌线粒体有关。2冠心Ⅱ号对大鼠心肌缺血-再灌注心肌细胞凋亡的保护作用目的:观察冠心Ⅱ号对大鼠心肌缺血-再灌注心肌细胞凋亡、心肌Bax和Bcl-2蛋白表达及心肌Caspase-3基因表达的影响,探讨冠心Ⅱ号对心肌缺血-再灌注心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法:大鼠随机分为冠心Ⅱ号组、假手术对照组及模型对照组,连续给大鼠灌胃冠心Ⅱ号标准汤剂10g生药。kg-1或等剂量生理盐水7d,采用冠状动脉结扎30min后恢复再灌注60min的方法建立大鼠心肌缺血-再灌注模型。（1）应用TUNEL法观察大鼠心肌缺血区的心肌细胞凋亡情况。（2）采用免疫组织化学法检测心肌细胞Bax及Bcl-2蛋白的表达水平。（3）采用荧光定量PCR法测定心肌细胞Caspase-3基因的表达水平。结果:（1）冠心Ⅱ号组和模型对照组心肌缺血区细胞凋亡数均高于假手术对照组,但冠心Ⅱ号组心肌细胞凋亡细胞数低于模型对照组。（2）与假手术对照组比较,模型对照组大鼠心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达增多,但Bcl-2/Bax比值下降;与模型对照组比较,冠心Ⅱ号组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白的表达增多,而Bax蛋白的表达下降,Bcl-2/Bax比值升高。（3）与假手术对照组比较,模型对照组大鼠心肌细胞Caspase-3基因的表达增多,冠心Ⅱ号组大鼠心肌细胞Caspase-3基因的表达低于模型对照组。结论:冠心Ⅱ号可减轻大鼠心肌缺血-再灌注的心肌细胞凋亡,对心肌缺血-再灌注损伤有保护作用,其机制可能与提高大鼠心肌Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达及Caspase-3基因的表达水平有关。综上所述,冠心Ⅱ号可通过减轻心肌细胞凋亡、提高机体抗氧化能力和保护心肌线粒体等机制对缺血心肌有保护作用;冠心Ⅱ号可通过提高心肌细胞Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白及Caspase-3基因的表达水平而抑制心肌缺血-再灌注心肌细胞凋亡的发生。