hTRAIL基因修饰成人骨髓基质干细胞靶向脑胶质瘤基因治疗的研究

论文题目: hTRAIL基因修饰成人骨髓基质干细胞靶向脑胶质瘤基因治疗的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 神经外科学

作者: 吴惺

导师: 朱剑虹,周良辅

关键词: 骨髓基质干细胞,迁徙,胶质瘤,基因治疗,凋亡

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 恶性胶质瘤是原发性中枢神经系统肿瘤中最常见的一种肿瘤,它具有恶性级别进行性升高、高度浸润性的特点。胶质母细胞瘤是其中恶性度最高的,虽然显微神经外科技术、放射治疗及化疗水平的不断提高,但其首诊后的平均生存期仍仅为9-12个月。上世纪90年代初,基因治疗的热潮曾为恶性胶质瘤的治疗带来一线曙光,其中以HSV-TK/GCV系统为代表的基因治疗虽然在动物试验中都取得了良好的效果,然而在Ⅰ期和Ⅱ期临床试验都未取得预期的疗效,这可能是由于病毒载体不稳定、目的基因不能长期表达、自体免疫、靶向性问题和病毒载体无法追踪浸润瘤细胞所致。骨髓干细胞(MSCs)能具有向肿瘤细胞迁徙的能力,而肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)具有特异性诱导肿瘤细胞凋亡的作用。基于以上基础,本研究将MSCs靶向肿瘤迁徙和TRAIL选择性杀伤肿瘤细胞结合探索TRAIL修饰MSCs双重靶向治疗脑胶质瘤的可能。首先我们采用利用1.073g/ml的Percoll梯度离心法,成功从成人骨髓中分离出单个核细胞,体外扩增成均一似成纤维细胞样细胞,其细胞表面CD105、CD166和CD44均为阳性,而CD11b、CD34和CD45均为阴性,在条件培养液下能分化为脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞。为了进一步研究所获MSCs是否具有向胶质瘤细胞迁徙的能力,将AAV-GFP标记的MSCs悬液加入与U87MG共培养,荧光显微镜下可观察到绿色GFP阳性MSCs均聚积于U87MG胶质瘤细胞克隆中,在无胶质瘤细胞的区域也不见GFP阳性细胞。Transwell实验发现正常培养液和脑组织溶解物对MSCs的迁徙几乎无影响,而U87MG肿瘤溶解物、U87MG细胞培养液或U87MG肿瘤细胞能显著的诱导MSCs向其迁徙,。而上述刺激物对NIH3T3细胞的迁徙无明显差异。在U87MG脑胶质瘤模型建立1周后,将LacZ标记的MSCs静脉途径移植,发现脑肿瘤中则可也大量蓝色的LacZ均匀分布于其中。脑肿瘤内的LacZ阳性的MSCs(150.52±26.13/section)显著高于对侧正常脑组织(4.88±1.11/section)和其它器官(心脏:0/section;肺脏:3.54±1.56/section;肝脏:8.63±1.27/section;脾脏:4.67±1.73/section;肾脏:19.78±2.94/section)(P<0.001)。种植于肿瘤对侧半球的MSCs大部分沿着白质纤维束如胼胝体向U87胶质瘤迁徙。接着,我们从pROF-Trail质粒中获得全长TRAIL基因片段,并将其重组于

论文目录:

摘要

Abstract

前言

总材料与方法

第一部分：骨髓基质干细胞(Mesenchymal stem cell，MSCs)的分离与培养

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分：成人骨髓基质干细胞靶向胶质瘤迁徙的实验研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分：表达膜结合型hTRAIL的成人骨髓基质干细胞的建立

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四部分：TRAIL基因修饰骨髓基质干细胞诱导脑胶质瘤凋亡的实验研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

小结

综述

致谢

论文独创性声明

论文使用授权声明

发布时间: 2005-09-19

参考文献

[1].HSV-tk、IL-18联合修饰骨髓基质干细胞治疗脑胶质瘤的实验研究[D]. 李春晖.河北医科大学2007
[2].体外转染癌基因的骨髓基质干细胞分化为原发性肝癌的研究[D]. 张刚庆.第一军医大学2005
[3].骨髓基质干细胞的生物学特性及对胶质瘤的趋向效应的实验研究[D]. 刘阳.第四军医大学2011
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hTRAIL基因修饰成人骨髓基质干细胞靶向脑胶质瘤基因治疗的研究

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