猪圆环病毒病小鼠动物模型的研究

论文摘要

自1974年德国学者Tischer从多株连续传代的PK-15细胞中发现了猪圆环病毒1型（PCV1）以来,猪圆环病毒2型（PCV2）及其所断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）直到1991年才被报道。仔猪系统衰竭综合征目前已遍布世界各国,引起的经济十分严重,病毒所诱导的宿主免疫抑制,产生继发感染,对养猪业的直接与间接损失更是难以估量。虽然PCV2是PMWS的主要病原,但触发PCV2感染并使其发展为PMWS尚需其他因素诱导,如病原体混合感染（细菌、猪繁殖与呼吸综合征病毒-PRRSV,猪细小病毒-PPV）、免疫刺激（佐剂和疫苗）等。诸多不确定性的因素给PCV2及其相关疾病的研究带来一定困难。因此,为进一步研究PCV2的致病机理,选择一种理想的实验动物,并建立一个好的实验动物模型,对PCV2的深入研究具有十分重要的意义。本研究选择昆明小鼠为实验动物,从PCV2的感染方法、感染宿主体内PCV2的分布以及病理组织的损伤、PCV2所致实验动物的繁殖障碍和PCV2与细菌联合感染的病理学等方面进行了研究,为建立有效的猪圆环病毒病动物模型奠定基础。1猪圆环病毒2型实验性感染小鼠方法的研究选用48只昆明小鼠,通过腹腔注射（n=24）、滴鼻接种（n=24）PCV2实验性感染小鼠。每一感染方式分别以四种不同的病毒量（10000 TCID50、1000TCID50,100TCID50、10TCID50）、每一病毒量感染小鼠6只。小鼠在感染后第28天处死,通过检测病毒复制与病理损伤评价小鼠的感染状态。结果显示：经腹腔和滴鼻接种均实现了PCV2对小鼠的感染,且病毒接种量在1000TICD50为宜。2小鼠实验性感染PCV2的病毒分布与病理学研究以1000TCID50PCV2腹腔注射昆明小鼠35只,分别在第3、7、14、21、28、35、42天剖杀。小鼠病理变化特征为：肺出血、肝局灶性坏死、脾淤血肿胀,淋巴结肿大出血,并在相应组织发现细胞凋亡与坏死,尤以淋巴器官细胞凋亡最为明显。免疫组化结果显示：PCV2在感染小鼠体内呈广泛性分布,病毒阳性信号在免疫器官的淋巴细胞、巨噬细胞、肺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞、脑神经细胞和肝细胞等被检测到。3小鼠感染猪圆环病毒2型的超微结构病变观察10只小鼠由腹腔注射PCV2细胞培养物0.1 mL/只（含病毒1000TCID50）,于感染14 d处死,电镜所观察的超微结构变化为淋巴器官、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑、肠等脏器实质细胞发生凋亡或坏死；细胞内线粒体水肿、内质网扩张；间质毛细血管淤血、炎症细胞浸润；并在脾脏、胸腺、淋巴结的淋巴细胞、巨噬细胞,以及肝细胞、肾足细胞、脑神经细胞的胞浆内发现病毒包涵体。PCR检测发现在感染鼠组织中可检测出PCV2 DNA。以上结果表明PCV2可在昆明小鼠多脏器实质细胞内复制,并诱导细胞凋亡。4猪圆环病毒2型感染小鼠致繁殖障碍的研究16只成年昆明小鼠分别在怀孕前（n=7）、怀孕早期（n=4）、怀孕晚期（n=5）腹腔内接种PCV2。结果：16只雌鼠有1只死亡、1只发生难产、1只发生死产。13只正常生产母鼠共产仔123只,其中生长不良者24只（19.5%）,哺乳期内死亡4只（3.2%）。病理学观察发现在母鼠、仔鼠脏器中均有典型的病理损伤,并可检出病毒。5猪圆环病毒2型与细菌联合感染小鼠的病理学研究通过对小鼠PCV2与副猪嗜血杆菌或C型兽疫链球菌混合感染,从比较病理学角度分析PCV2与细菌致病的协同作用,结果表明：混合感染较单一感染的病情严重、其发病率、死亡率增高；病理组织学观察进一步发现混合感染鼠中,其脏器的病理变化加剧,实质细胞坏死和炎性渗出更为严重,由此说明PCV2与细菌混合感染具有明显的协同致病作用。结论：PCV2能够在昆明小鼠体内复制,所引起小鼠的组织损伤与PMWS病变一致；PCV2与细菌混合感染具有明显的致病协同作用。因此,昆明小鼠可以作为猪圆环病毒的动物模型。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述
• 1 猪圆环病毒及其病机理
• 2 猪圆环病毒2型的检测方法
• 3 猪圆环病毒病及其动物模型
• 4 研究的意义与目的
• 第二章 昆明小鼠实验性感染PCV2的方法研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 眼观病变
• 2.2 组织学病变
• 2.3 组织中PCV2 PCR检测结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 小鼠实验性感染猪圆环病毒2型的病毒分布与病理学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 眼观病变
• 2.2 组织学病变
• 2.3 PCV2分布
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 小鼠感染猪圆环病毒2型的超微结构病变观察
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 A组（接种PCV2）小鼠超微结构病变
• 2.2 B组（control）小鼠的超微结构变化
• 2.3 PCR检测结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 小鼠感染PCV2致繁殖障碍的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 母鼠孕期情况
• 2.2 仔鼠生长情况
• 2.3 病理变化
• 2.4 PCV2 PCR的检测结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第六章 猪圆环病毒2型和细菌联合感染小鼠的病理学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 各组小鼠临床症状以及死亡情况
• 2.2 病理变化
• 2.3 组织中PCV2的PCR检测
• 2.4 小鼠细菌分离鉴定结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第七章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历