论文摘要
本文研究淫羊藿全草中黄酮类成分对肾阳虚小鼠肾脏和性腺雄激素受体表达的影响，为淫羊藿总黄酮雄激素样作用机制的研究以及肾阳虚的有效治疗途径提供实验依据。淫羊藿为常用的补肾壮阳中药，本实验研究从淫羊藿全草中提取的黄酮类化合物对肾阳虚小鼠雄激素受体基因表达的影响。实验采用10倍量70％乙醇回流提取，重复2次，石油醚，聚酰胺柱层析分离纯化，获得淫羊藿总黄酮（TFE）；再将70只ICR雄性小鼠每组10只随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、金匮肾气丸阳性组、甲基睾酮阳性组、TFE小剂量给药组、TFE中剂量给药组和TFE大剂量给药组；除正常组外，其余六组均腹腔注射氢化可的松1.25mg／kg造模14天，正常组腹腔注射等体积生理盐水；根据药典和小鼠体重分别给TFE小、中、大剂量组以29.3 mg／Kg、58.5 mg／Kg和117.2mg／kg的TFE，阳性组分别以6g／Kg金匮肾气丸和1.3mg／kg甲基睾酮片溶液灌胃，正常组和模型对照组以等体积蒸馏水灌胃14天；实验动物摘眼球采血后引颈处死，放射免疫法测血清中睾酮的含量；取肾脏、性腺，分别用免疫组织化学和实时定量RT-PCR的方法检测雄激素受体基因在蛋白质表达水平，和在mRNA水平的表达情况。结果表明：1．模型组小鼠的体重小于正常组，差异极显著（P＜0.01）；TFE大剂量组小鼠体重大于模型组（P＜0.05），但与正常组比较仍有显著差异（P＜0.05）；TFE中剂量组小鼠体重较模型组大（P＜0.05），与正常组比较无显著差异（P＞0.05）；TFE小剂量组小鼠体重与正常组接近（P＞0.05），且与模型组相比，差异极显著（P＜0.01）。以上结果显示，模型组实验小鼠的体重较正常组明显下降，而TFE处理则可以缓解小鼠体重下降的症状，其中以TFE小剂量组效果最为明显。2．模型组血清睾酮的含量明显低于正常组，差异极显著（P＜0.01）；TFE小剂量组与正常组接近（P＞0.05），且与模型组相比，差异极显著（P＜0.01）；TFE大剂量组睾酮含量高于模型组，但与正常组之间仍有显著差异（P＜0.05）。以上结果说明，模型组血清睾酮的含量较正常组明显下降，TFE各剂量均可抑制其下降，提高小鼠血清中睾酮的含量，其中以小剂量组效果最为明显。3．免疫组化结果显示，肾脏和性腺模型组AR的吸光度值均低于正常组，差异极显著（P＜0.01）；肾脏TFE大、中、小剂量组与模型组比较表达量均上升，吸光度值有显著差异（P＜0.05）；性腺TFE大剂量组AR吸光度值大于模型组，但与正常组比较仍有显著差异（P＜0.05），TFE小剂量组与模型组比较，差异极显著（P＜0.01）。以上结果说明，模型组AR在肾脏和性腺细胞中表达量较正常组明显下降，TFE能在一定程度上逆转其下降，上调AR的表达，其中以TFE小剂量效果最佳。4．实时定量RT-PCR结果显示，与正常组比较，模型组AR mRNA水平明显降低（P＜0.01）；性腺TFE大、中、小剂量组与模型组比较，AR mRNA表达量均上升，差异显著（P＜0.05），且与正常组比较无显著差异（P＞0.05）；肾脏TFE大、中剂量组吸光度值大于模型组，与正常组比较无显著差异（P＞0.05），TFE小剂量组AR mRNA表达量与正常组比较无显著差异（P＞0.05），且大于模型组，差异极显著（P＜0.01）。以上结果说明，肾阳虚小鼠AR mRNA表达量下降，TFE能够抑制其下降，提高AR mRNA表达量，从而减轻过量糖皮质激素对机体造成的伤害，其中以TFE小剂量效果最佳。以上实验结果表明，TFE具有明显的雄激素样作用，可以抑制由肾阳虚引起的小鼠体重下降和血清睾酮水平降低，逆转肾脏和性腺AR蛋白质和mRNA水平的降低，提高其表达量，缓解肾阳虚症状。其中以TFE小剂量组效果最佳，其原因可能在于过量TFE会导致机体激素的负反馈调节，影响肾阳虚证的治疗效果；此外，使用更小的TFE剂量是否会有更好的效果，还有待进一步的实验研究来证明。