于艳波(黑龙江省方正县中医院150800)
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)33-0155-02
【摘要】厌氧菌是一大群在无氧环境下生长的细菌，厌氧菌在人体肠道、口腔、泌尿生殖道的正常菌群中占优势。当人体菌群失调时，厌氧菌可能侵犯人体许多部位，发生内源性厌氧菌感染。且感染率相当高，其中部分是厌氧菌单独感染，而大部分是与需氧菌混合感染。感染早期总是以需氧菌占优势，待需氧菌耗尽环境中的氧，机体抵抗力削弱后，造成局部组织的氧化还原电势降低，便有利于厌氧菌生长，同时需氧菌为厌氧菌提供维生素K等生长因子，而厌氧菌能保护需氧菌免遭白细胞的吞噬，这种协同作用造成了厌氧菌感染的普遍性。过去厌氧菌感染以经验用药为主，因为厌氧菌对现已上市的药物的敏感性较好，因此一般情况下不需要做药敏试验，多数情况下治疗效果满意。但是近年来，随着抗菌药物的广泛使用，厌氧菌的耐药性也逐年增高，出现了耐甲硝唑菌株，耐药率约为5%～10%左右，所以单靠经验用药已无法得到满意的治疗效果，因此应重视和加强厌氧菌的培养和药敏试验。
【关键词】厌氧菌检测临床应用
厌氧菌在感染性疾病中的致病作用日益受到临床重视。据文献报道，在菌血症中有10%可检出厌氧菌，牙周炎及牙根管炎厌氧菌感染率高达96.67%～100%，肺部厌氧菌感染率高达41.1%～84.2%，厌氧菌和需氧菌混合性感染率高达82.23%。临床感染的很多实例证明开展厌氧菌检验极为必要。
(一)标本采集
1.原则绝大多数厌氧菌是人体正常菌群，对人体来说是内源性的。厌氧菌感染时，常常是在一定区域，厌氧菌的数量大大超过了需氧菌。因此厌氧菌的检验原则是：一切可能污染正常菌群的标本都不宜做此检验。下列标本不能进行厌氧菌的检验：咯痰、齿龈拭子、小肠内容物、咽喉内容物、溃疡面分泌物、阴道分泌物、排出的尿、粪便、洗胃液等等。
2.临床标本的采集方法临床标本最简便的采集方法是：用注射器抽取样本后立即(将针头)插入橡皮塞内。
对各部位不同类型的临床标本采用不同的采集方法。
(1)任何闭合性脓肿：用注射器抽取，注射针头插入橡胶塞内，以免空气侵入。
(2)支气管：用Wimberg双层聚四氟乙烯套管绒毛刷，在利多卡因局部麻醉后进行。或纤维支气管镜头带套管(自制)，支气管镜到达后伸出内管取样后，抽回套管取出内管。漱口后取新咯痰(漱口液为2g/L灭滴灵与0.1g/L洗必泰混匀)。
(3)胸腔：穿刺(术前做好消毒工作)，注射器抽取。
(4)尿道：皮肤严格消毒后经耻骨联合上方穿刺，或用清洁中段尿。
(5)生殖道、盆腔：以吡咯烷酮碘(Povidneiodine)消毒后，后弯隆穿刺，取盆腔渗出液。子宫分泌物用双导管抽取，抽取后将取样管退回外套管后取出，以防阴道正常菌群污染。
(6)阑尾脓肿等腹腔脏器感染：无菌外科切开后抽取。
(7)溃破脓肿：先用无菌棉签擦去表面脓液取深部脓液。
(8)口腔：使用Newman带空气导管的藻酸钙倒蒯或活动尖端的刮器采样，导管可抽回至内管并充入无氧的CO2，标本采集后退回外套管取出。、
(9)血液：做好采血部位消毒，一般使用3％碘酊消毒皮肤，消毒7～13min后采血，一次采血量以多于5ml为好；在用抗生素或化疗前24h宜采血2～3次。一般使用10ml磨口试管，内含溶血剂聚乙二醇辛基醚(乳化剂op)和抗凝剂共0.8ml，经高压灭菌后置室温备用。取病人血5ml，立即注入L-c管，并充分颠倒混匀10次以上。待L-c管内红细胞完全溶解后(液体透明)，将L-c管以400r/min的转速离心15～20min，然后将离心的L-c管的上清弃去，取管底沉渣划线接种血平皿，同时涂片镜检。将平皿作需氧菌和厌氧菌两种培养，到第7天无菌生长才报告阴性。
(二)标本输送
标本输送应注意如下几点：
1.尽量在厌氧环境中输送，如注射器插入橡皮塞或无氧小瓶直接输送。
2.常温下输送比低温下输送更好。
3.混合气体中输送比单纯CO2中输送好。
4.输送容器内保持一定的湿度，避免标本干燥而使厌氧菌死亡。
(三)标本分离的程序临床标本分离程序
(四)厌氧菌鉴定的总则
厌氧菌的分离培养鉴定是个较复杂的工作，一般依据《伯杰系统细菌鉴定手册》(1，2卷和评议版)所列的表型特征(形态、生化性状、生长需要等)和遗传特征(DNA杂交符合率或DNA中G+cmol％含量等)进行系统鉴定，但对于一般的临床检验室多使用Finegold的厌氧菌的三级鉴定方法进行鉴定。
1.一级鉴定又称初级鉴定，一般为初代培养结果的观察。主要根据耐氧试验、选择性培养基、标本的来源和细菌菌落、菌细胞特征，报告厌氧菌检出结果。一般只能鉴定到类、群或属(种)。如在七叶苷胆汁(BBE)平皿上出现黑色带晕的大于1mm的菌落，镜检为革兰阴性杆菌，染色不均，菌体可见未染色的空泡，多形态，可初步定为脆弱类杆菌；又如在KV血平皿上，菌落深陷生长，培养基表面留有坑痕者，可能是解脲类杆菌和纤细类杆菌等。
2.二级鉴定在一级鉴定的基础上如观察菌落形态、溶血性、色素产生、芽胞形成等，进一步结合细菌生长特性、生化试验结果等将厌氧菌鉴定到属或种。例如在卡那霉素、万古霉紊溶血平皿上有棕色或黑色菌落，或虽无黑色但在紫外线照射下有红色荧光，不耐20％胆汁，对粘杆菌素(10mg/L)敏感性不定，可定为产黑色素普氏杆菌或卟啉单胞菌。有不少二级鉴定中加入抗生素纸片的敏感性试验如Wadsworth手册的标准，对一些厌氧菌属的鉴定，也具简便可靠的特点。
3.三级鉴定在一、二级鉴定基础上，补充菌的代谢产物的GLC分析(正确定菌属)，并补充系统生化性状测定，以及DNA中c士cmol％测定或使用标准菌棒进行杂交试验以确定厌氧菌菌种。
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