血管生成素对黑色素瘤细胞生长及对碱性成纤维生长因子表达的影响

论文摘要

血管生成素基于其促血管发生活性,最早作为肿瘤血管生成因子被分离出来。已知血管生成素在血管内皮细胞中进行核转移作用,在核仁中发生积累并刺激rRNA的转录,进而诱发内皮细胞的增殖促进血管发生。目前对于血管生成素的研究主要集中在其如何诱发肿瘤的血管发生,进而促进肿瘤的进一步生长和恶化。本文中我们研究血管生成素在黑色素瘤细胞生长中的作用,并分析血管生成素对于另一血管生成因子bFGF表达及功能的影响。我们将血管生成素的基因分别以正向和反向转入人黑色素瘤A375细胞中,得到了稳定的低表达和高表达血管生成素的细胞株。我们发现在转入反义血管生成素基因的细胞株中,细胞的增殖受到了抑制,同时bFGF诱发的细胞增殖也受到了抑制,但是bFGF的表达水平却提高了。相反,在转染正义血管生成素基因的细胞株中,细胞的增殖提高了,同时bFGF诱发的细胞增殖也提高了,但是bFGF的表达水平下降了。另外我们利用免疫荧光实验进行了血管生成素的核转移分析,发现血管生成素在A375细胞中能够进行核转移作用。进一步的免疫透射电镜实验分析表明血管生成素进入细胞核后,其在核仁的分布与rDNA的分布及rRNA的合成区域相同,可能其作用与rDNA相关。另外我们发现一种氨基糖苷类抗生素新霉素能够抑制血管生成素在A375细胞中的核转移作用。新霉素通过抑制血管生成素的核转移作用进而抑制细胞的增殖。综上,我们的结果表明血管生成素通过核转移作用促进A375细胞的增殖,并且参与bFGF诱发的细胞增殖作用。所以血管生成素除了其具有血管发生活性而对黑色素瘤的生长发挥重要作用外,还可以直接促进肿瘤细胞的增殖。而且我们还发现血管生成素对bFGF的表达具有负调节作用。因此以血管生成素为靶点可能会找到治疗黑色素瘤的新方法。

论文目录

中文摘要

英文摘要

第一章文献综述

一、血管生成因子与肿瘤的关系

（一）血管生成简介

（二）血管生成与肿瘤

（三）抗血管生成的肿瘤治疗

（四）血管生成因子简介

（五）血管生成因子对肿瘤的生长、转移及预后的意义

二、血管生成素的结构功能及与肿瘤的关系

（一）血管生成素的结构与性质

（二）血管生成素的生物学功能

（三）血管生成素的作用机制

（四）血管生成素与肿瘤

（五）血管生成素的抑制剂

三、bFGF的结构功能及与肿瘤的关系

（一） bFGF的结构与性质

（二） bFGF的作用机制

（三） bFGF的生物学作用

（四） bFGF与肿瘤

四、黑色素瘤的研究进展

（一）黑色素瘤简介

（二）黑色素瘤与血管生成因子

（三）血管生成素在黑色素瘤中的表达及其作用

（四） bFGF在黑色素瘤中的表达及其作用

（五）抗血管生成因子的黑色素瘤治疗

第二章引言

一、研究背景和立题依据

二、本文的研究内容和意义

第三章实验材料与方法

一、实验材料

（一）细胞和质粒

（二）主要试剂

（三）主要仪器

二、实验方法

（一）大量制备质粒的方法

（二）哺乳动物细胞培养

（三）哺乳动物细胞转染

（四）哺乳动物细胞基因组的提取

（五）哺乳动物细胞总RNA的提取

（六）逆转录PCR （RT-PCR）

（七）酶联免疫吸附实验

（八） SDS-PAGE 电泳及Western Blotting

（九）免疫荧光

（十）免疫胶体金透射电镜

（十一） MTT法

第四章实验结果与分析

一、稳定转染血管生成素基因的细胞株的获得

（一）质粒的制备及电穿孔转染与筛选

（二）阳性细胞克隆的鉴定

二、外源血管生成素基因的转入对细胞内源血管生成素表达的影响

（一）外源血管生成素基因的转入对细胞内源血管生成素m RNA 表达的影响

（二）外源血管生成素基因的转入对细胞内源血管生成素蛋白表达的影响

三、血管生成素对A375 细胞生长的影响

（一） MTT 法实验条件的确定

（二）血管生成素对细胞增殖的影响

四、血管生成素在A375 细胞中进行核转移作用

（一）血管生成素核转移作用的免疫荧光分析

（二）免疫电镜分析血管生成素在细胞核中的定位

五、新霉素对A375 细胞的增殖具有抑制作用

（一）新霉素抑制血管生成素在A375 细胞中的核转移作用

（二）新霉素抑制A375 细胞的增殖

六、血管生成素对bFGF 表达的影响

（一）外源血管生成素基因的转入对细胞bFGF mRNA 表达的影响

（二）外源血管生成素基因的转入对细胞bFGF 蛋白表达的影响

七、血管生成素对bFGF 诱发的细胞增殖的作用

第五章讨论

一、外源血管生成素基因的转入影响细胞内源血管生成素的表达

（一）稳定转染细胞系的建立

（二）外源血管生成素基因的转入影响细胞内源血管生成素的表达

二、血管生成素对A375 细胞的增殖具有促进作用

三、血管生成素通过核转移作用促进A375 细胞的增殖

（一）血管生成素在A375 细胞中进行核转移作用

（二）新霉素抑制血管生成素在A375 细胞中的核转移作用

（三）新霉素对A375 细胞的增殖具有抑制作用

四、血管生成素对bFGF 表达具有负调节的作用

五、血管生成素对bFGF 诱发的细胞增殖具有促进作用

结论与创新点

参考文献

在学期间公开发表论文及著作情况

在读期间参加科研项目情况

血管生成素对黑色素瘤细胞生长及对碱性成纤维生长因子表达的影响

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