中风后遗症“气虚血瘀”大鼠血管内皮生长因子的表达及补阳还五汤作用的研究

论文摘要

目的:根据中医对中风后遗症病因病机的认识,采用多因素复合方法制作中风后遗症大鼠病证模型。在以前的工作基础上,进一步观察该模型大鼠及补阳还五汤治疗后VEGF表达的变化,从而为该模型的建立及补阳还五汤药理作用提供依据。方法:1、造模方法:采用复合因素造模,暂时夹闭右侧颈总动脉(30min)并结扎左侧颈总动脉,机械开颅电凝阻断右侧大脑中动脉,术后24h用“大鼠电脉冲随机刺激仪”对大鼠行电刺激,刺激强度为50～80V、0.5～25Hz、0.1～1.1ms,连续刺激15d,每天2h,加重脑缺血损伤并造成“气虚血瘀”表现。2、观察补阳还五汤对中风后遗症“气虚血瘀”大鼠脑组织病理改变的影响:SPF级wistar雄性大鼠54只,体重200±20g,根据完全随机法分成正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤治疗组(分高、中、低剂量3个组别),每组9只。补阳还五汤治疗组于造模结束后连续15d灌服补阳还五汤水煎液,其余各组灌服等量生理盐水。用TTC和HE染色观察脑组织病理学形态变化,并进行神经体征评分,同组不同时间点的评分以配对t检验分析,同一时间点不同组间评分以单因素方差分析进行统计分析。3、观察补阳还五汤对中风后遗症“气虚血瘀”大鼠血脑屏障通透性的影响:SPF级wistar雄性大鼠96只,体重200±20g,根据完全随机法分成正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤治疗组(分高、中、低剂量3个组别),每组16只。补阳还五汤治疗组于造模结束后连续15d灌服补阳还五汤水煎液,其余各组灌服等量生理盐水。每组大鼠一半用干湿重法测定脑含水量,另一半用伊文氏蓝(Evans Blue,EB)法观察血脑屏障通透性的变化,结果采用单因素方差分析进行统计分析。4、观察补阳还五汤对中风后遗症“气虚血瘀”大鼠血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响:SPF级Wistar雄性大鼠96只,体重200±20g,根据完全随机法分成正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤治疗组(分高、中、低剂量3个组别),每组16只。补阳还五汤治疗组于造模结束后连续15d灌服补阳还五汤水煎液,其余各组灌服等量生理盐水。用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测VEGF蛋白表达水平:免疫组织化学方法(SABC)观察脑组织VEGF阳性细胞表达,结果采用单因素方差分析进行统计分析。结果:1、模型组大鼠表现为典型中风后遗症“气虚血瘀”的症状和体征。神经体征评分显示,术后30d,与模型组相比,补阳还五汤中、高剂量组可明显改善神经体征评分(P＜0.01),低剂量组与模型组相比虽无统计学差异(P＞0.05),显示中、高剂量组均可促进大鼠神经功能恢复,表明补阳还五汤的治疗有利于大鼠神经功能的恢复。而病理切片显示,补阳还五汤高、中、低剂量组均能改善大鼠脑组织病理学形态变化。2、各组间脑含水量结果采用比较,模型组脑含水量与其它各组比较,差异均显著(P＜0.05);补阳还五汤高、中、低剂量组相互比较,差异均不显著(P＞0.05),反映了模型组大鼠脑含水量处于较高水平,脑组织水肿严重,补阳还五汤能减轻模型大鼠脑水肿。各组间大鼠脑组织EB含量差异显著。模型组大鼠脑组织EB含量与正常组及假手术组相比,明显升高(P＜0.01),与中、高剂量组相比,差异显著(P＜0.05)。反映模型组血脑屏障破坏,通透性升高,而补阳还五汤能修复受损的血脑屏障,降低通透性。3、各组间VEGF蛋白水平比较,差异显著。模型组与正常及假手术组相比,差异显著(P＜0.01):与补阳还五汤高、中、低剂量组相比,均有显著差异(P＜0.01)。低剂量组与中、高剂量组相比,差异均显著(P＜0.05),而中、高剂量组间差异不显著(P＞0.05)。反映补阳还五汤能提高中风后遗症期模型大鼠VEGF蛋白表达水平,以中、高剂量组效果为好。各组间VEGF阳性细胞数比较,差异显著。模型组与正常组及假手术组相比,差异显著(P＜0.01),与补阳还五汤高、中、低剂量组相比,差异显著(P＜0.01),低剂量组与中、高剂量组相比,差异均显著(P＜0.01),而中、高剂量组间差异不显著(P=0.115)。反映补阳还五汤能提高中风后遗症期模型大鼠VEGF蛋白表达水平,增加阳性细胞数量,以中、高剂量组效果为好。结论:在中风后遗症阶段,由于受损的神经功能得不到恢复,因此模型大鼠表现出一系列神经功能缺损症状,并且血脑屏障受损,通透性升高,脑组织水肿较严重,这些原因均加重了神经功能的损害,影响神经功能恢复。实验中虽观察到模型大鼠虽有VEGF蛋白表达及可见一定数量的VEGF免疫阳性细胞,但是其表达水平不高且阳性细胞数量较少,虽与正常组和假手术组相比有明显意义,考虑这是缺血后VEGF的一种保护性的表达,但结合模型大鼠症状、体征等外在表现来看,其表达水平及强度尚不足以弥补缺血所引起的病理性损伤,尚不足以起到促进神经功能恢复的作用。经过补阳还五汤治疗后,模型大鼠的各项指标均得到改善:病理症状及神经体征改善明显,HE染色显示脑损伤程度有所减轻,脑含水量和血脑屏障通透性得到明显改善,VEGF蛋白表达水平增高,阳性细胞数量增多。说明补阳还五汤能够促进中风后遗症大鼠VEGF表达,减轻脑水肿,改善脑血管通透性,推测这可能是其发挥抗脑缺血损伤作用和促进中风后遗症期神经功能恢复的机制之一。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 理论研究
• 1.1 中医学对中风的认识和研究
• 1.1.1 中风的概念
• 1.1.2 中风的病因
• 1.1.3 中风的病机
• 1.1.4 中风的治疗
• 1.1.5 中风的分型
• 1.1.6 中风神经损伤机制的现代研究进展
• 1.2 中医学对中风后遗症的认识和研究
• 1.2.1 中风后遗症的概念
• 1.2.2 中风后遗症的症状
• 1.2.3 中风后遗症的病因病机
• 1.2.4 中风后遗症的治疗
• 1.2.5 关于气虚血瘀的现代研究进展
• 1.2.6 中风后遗症动物模型制作研究现状
• 1.3 补阳还五汤概述
• 1.3.1 补阳还五汤配伍特点
• 1.3.2 补阳还五汤现代研究进展
• 1.4 VEGF概述
• 1.5 本课题的前期研究工作现状
• 第二章 实验研究
• 第一部分 中风后遗症"气虚血瘀"大鼠模型脑组织病理变化及补阳还五汤的作用
• 材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 第二部分 中风后遗症"气虚血瘀"大鼠模型血脑屏障通透性的变化及补阳还五汤的作用
• 材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 第三部分 中风后遗症"气虚血瘀"大鼠模型VEGF表达的变化及补阳还五汤的作用
• 材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附图
• 附中药材品种鉴定
• 缩写词表
• 成果
• 致谢
• 研究生毕业论文统计学审稿证明