Aβ（25-35）诱导PC12细胞损伤的蛋白质组学研究

论文摘要

本研究采用MTT及荧光染色法检测Aβ（25-35）对PC12细胞的毒性;首次采用差异凝胶电泳（DIGE）和质谱（MS）技术分析Aβ（25-35）引起的蛋白质组学改变。本研究,成功地建立了Aβ诱发PC12细胞损伤的符合国际标准的AD细胞模型,首次发现并鉴定了Aβ（25-35）诱导的PC12细胞中的早期蛋白质组学改变。质谱鉴定出7个蛋白。所鉴定的差异表达蛋白可分为3类:①具有分子伴侣活性的蛋白:葡萄糖调节蛋白75（glucose-regulated protein75,GRP75）、热休克同源蛋白71（heat shock cognate 71 kDa protein,HSC71）、calreticulin,这些蛋白的表达量均上调。②细胞骨架蛋白:β-微管蛋白（tubulin beta chain 15,TBETA-15）和低分子量神经细丝（neurofilament light polypeptide,NF-L）,它们的表达量亦上调。③与能量代谢有关的酶:肌酸激酶B （creatine kinase-B, CKB）和醛缩酶A（aldolase A）,这两种蛋白的表达量均下调。这7个蛋白可能为AD早期诊断和药物治疗研究提供有价值的线索。

论文目录

• 缩略词索引表
• 第一部分 Aβ（25-35）的细胞毒性作用及雷沙吉兰（Rasagiline）的防护作用
• 前言
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 细胞株
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 PC12 细胞培养
• 1.2.2 细胞活性分析
• 1.2.2.1 MTT 还原分析
• 1.2.2.2 丫啶橙（AO）和溴化乙啶（EB）染色
• 1.2.2.3 统计学处理
• 2. 结果
• 2.1 20μM 的Aβ降低PC12 细胞存活率和诱导细胞凋亡
• 2.2 雷沙吉兰对Aβ（25-35）损伤PC12 细胞的防护作用
• 2.3 雷沙吉兰对Aβ（25-35）诱导PC12 细胞凋亡的影响
• 3. 讨论
• 第二部分 Aβ（25-35）诱导 PC12 细胞损伤的蛋白质组学研究
• 前言
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 细胞株
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 主要仪器
• 1.1.4 试剂的配制
• 1.2 方法
• 1.2.1 PC12细胞培养
• 1.2.2 DIGE 分析
• 1.2.2.1 分析胶的制备
• 1.2.2.2 制备胶电泳及蛋白质鉴定
• 2 结果
• 2.1 蛋白质的2D-DIGE 分析
• 2.2 蛋白的质谱鉴定
• 3. 讨论
• 3.1 具有分子伴侣活性的蛋白
• 3.2 细胞骨架蛋白
• 3.3 与能量代谢有关的酶
• 结论
• 文献综述一 Aβ的神经毒性作用及其引起细胞凋亡的机制
• 文献综述二 蛋白质组学和差异凝胶电泳（DIGE）技术及其在阿尔茨海默病（AD）研究中的应用
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 博士期间已发表论文
• 致谢