大连高尔夫球场主要草坪病害生防木霉菌株的筛选

论文摘要

草坪业在我国属于新兴行业,发展迅速,国内许多城市已经意识到草坪面积的大小直接反映一个城市的现代化水平。随着我国草坪建植面积的增加,草坪病害问题越发突出,已经逐渐成为我国草坪业发展的主要制约因素。木霉菌可以作为生防因子来防治常见的草坪病害,它对常见的草坪病害病原菌具有良好的拮抗作用。其拮抗作用主要表现在对生存空间和营养物质的竞争作用、重寄生作用、抗生作用、诱导植物产生抗性、激发植物的防御机制以及调节根系微环境几个方面。本文针对草坪上2种常见的真菌病害展开了生防研究,具体研究结果如下:2009年49月,分别对大连3个地点的草坪土壤进行样品采集,共采集土壤样品45份。通过平板稀释法在孟加拉红培养基上进行真菌的分离培养,共分离出78株木霉菌（Trichoderma spp.）,经形态学鉴定分别属于:哈茨木霉（T. harzianum）、钩状木霉（T. hamatum）、棘孢木霉（T. asperellum）、渐绿木霉（T. viridescens）、黄绿木霉（T. aureoviride）、深绿木霉（T. atroviride）、绿色木霉（T. viride）、绿木霉（T. virens）8个种;同时,从草坪枯萎病和褐斑病病草根部分离得到2株病原菌,经形态学鉴定分别是:尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）和立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）。分别以78株木霉菌和2株病原菌做供试菌株,在PDA平板上进行对峙试验,试验共筛选出15株拮抗作用较好的木霉菌。采用微型电钻研磨法分别提取15株木霉菌的基因组DNA,以rDNA-ITS作为分子标记进行PCR扩增、测序,测序结果登陆NCBI网站进行Nucleotide Blast分析和鉴定,并用MEGA软件构建系统发育树,对不同木霉菌之间的亲缘关系进行分析。分子鉴定结果显示这15株木霉菌分别为:钩状木霉（T. hamatum）4株、棘孢木霉（T. asperellum）4株、渐绿木霉（T. viridescens）1株、黄绿木霉（T. aureoviride）1株、深绿木霉（T. atroviride）3株、绿色木霉（T. viride）1株、绿木霉（T. virens）1株,与之前的形态学鉴定相符合。对15株木霉菌中拮抗效果最好的木霉Th12菌株,采用单因素正交试验进行液体发酵条件的优化。试验结果表明,木霉Th12菌株的最适发酵条件为:以葡萄糖为碳源,蛋白胨为氮源的培养液C;培养温度为25℃,培养基初始pH为6;接菌量为0.8ml;装瓶量为50ml;摇床转速为180r/min,发酵培养3天。在该液体发酵条件下木霉Th12菌株的菌丝体生物产量能达到最大值,为进一步研究和开发用于草坪病害防治的生防木霉菌制剂提供了理论和应用依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 我国草坪业的发展现状
• 1.2 常见草坪病害及其防治中存在的问题
• 1.2.1 常见草坪病害的种类
• 1.2.2 草坪病害防治中存在的问题
• 1.3 木霉菌在植物病害防治中的作用
• 1.3.1 木霉菌在生物防治中的应用
• 1.3.2 木霉菌对土传病害的防治
• 2 木霉菌生防机制的研究
• 2.1 竞争作用
• 2.2 重寄生作用
• 2.2.1 趋化性生长
• 2.2.2 特异性识别
• 2.2.3 吸附和缠绕
• 2.2.4 细胞壁降解
• 2.3 抗生作用
• 2.4 诱导植物抗性、激发植物防御机制
• 2.5 调节根系微环境
• 3 拮抗木霉菌株的筛选
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 木霉菌的分离和形态学鉴定结果
• 3.2.2 木霉菌单独培养半径平均值
• 3.2.3 木霉菌与病原菌的对峙培养结果
• 3.3 结论与讨论
• 4 rDNA-ITS 序列分析及其在木霉菌鉴定中的应用
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 DNA 提取
• 4.1.3 PCR 扩增
• 4.1.4 PCR 产物纯化测序
• 4.1.5 Blast 分析及序列处理
• 4.1.6 系统进化树的建立
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 PCR 扩增结果
• 4.2.2 15 株木霉菌rDNA-ITS 序列比对结果
• 4.2.3 用MEGA 软件构件基因进化树
• 4.3 结论与讨论
• 5 优势拮抗木霉Th12 菌株液态发酵条件的优化
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 发酵液类型对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.2 碳源对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.3 氮源对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.4 发酵时间对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.5 发酵温度对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.6 初始pH 对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.7 接菌量对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.8 装瓶量对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.2.9 摇床转速对Th12 菌丝体产量的影响
• 5.3 结论与讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录A 木霉Th12 菌株和病原菌单独及对峙培养结果
• 附录B 15 株木霉菌rDNA-ITS 测序结果
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢