Livin和Caspase-3在结直肠癌和腺瘤中的表达及其临床意义

论文摘要

目的:结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,在西方国家它是癌症引发死亡的“第三大杀手”,在我国其发病率在各种消化道肿瘤中己升至第2位且其发病率呈逐年上升趋势。近年来,尽管手术、放疗、化疗等综合治疗使结直肠癌的术后生存得到了很大的改善,但是疗效并不乐观,近25年的结直肠癌5年生存率徘徊在50-60%左右,结直肠癌的预后与早期诊断、及时正确治疗直接相关,然而就诊时大部分患者已属中晚期,因此,早期诊断更显其突出地位。Livin是近年发现的凋亡抑制蛋白家族（inhibitor of apoptosis protein, IAP）成员之一,因其特异性高表达于大多数肿瘤组织,与肿瘤的发生、发展、预后及对化疗药物的耐药相关,有望作为一种新的标志物应用于肿瘤的临床诊断与治疗,己成为当今研究的热点。Livin主要是通过直接抑制半胱氨酸蛋白酶caspases,尤其是抑制Caspase-3/-7和Caspase-9的活性,达到阻断凋亡受体及线粒体相关的凋亡途径,而实现对细胞凋亡的抑制作用,还可通过激活TAK1/JNK1信号传导途径抑制细胞凋亡,并且其抑制细胞凋亡的作用还受到线粒体释放的caspase活化蛋白（SMAC）的调节。Livin在正常成人大多数终末组织中低表达或不表达,但在大多数肿瘤组织中特异性高表达。然而Livin在结直肠肿瘤尤其是腺瘤中的表达情况国内外研究很少。本研究从基因和蛋白水平分别检测了Livin和Caspase-3在结直肠癌、腺瘤和正常大肠粘膜组织中的表达情况,并结合临床病理资料进行分析,以探讨Livin在结直肠癌发生、发展中的作用,并研究其与Caspase-3的关系。方法:1半定量RT-PCR法:采用RT-PCR法检测所取标本中Livin-αmRNA、Livin-βmRNA、Caspase-3 mRNA和内对照β-actin mRNA的表达情况,计算Livin-αmRNA、Livin-βmRNA、Caspase-3 mRNA与β-actin mRNA的比值,然后进行统计学分析。2免疫组织化学法:采用SP法,按照试剂盒说明书进行操作,用1:100稀释的兔抗人Livin多克隆抗体和1:200稀释的兔抗人Caspase-3多克隆抗体分别检测各标本中Livin和Caspase-3蛋白的表达情况,PBS代替一抗作为阴性对照。结合临床病理资料对其结果进行相关统计学分析。结果:1在用RT-PCR所检测的81例结直肠癌、25例腺瘤和40例正常大肠粘膜标本中均可见Livin-αmRNA、Livin-βmRNA和Caspase-3 mRNA的表达。Livin-αmRNA相对含量分别为:结直肠癌0.34±0.17,腺瘤0.33±0.13,正常大肠粘膜0.12±0.11,结直肠癌与正常大肠粘膜比较有统计学意义（P=0.018<0.05）;腺瘤与正常大肠粘膜间有统计学意义（P=0.016<0.05）;结直肠癌与腺瘤间无统计学意义（P=0.978>0.05）;合并腺瘤和单纯腺瘤Livin-αmRNA的表达无明显差异（均数分别为0.3774,0.2641;P=0.681>0.05）。Livin-βmRNA相对含量分别为:结直肠癌0.32±0.04,腺瘤0.47±0.10,正常大肠粘膜0.65±0.13,结直肠癌与正常大肠粘膜比较有统计学意义（P=0.028<0.05）;结直肠癌与腺瘤间无统计学意义（P=0.261>0.05）;腺瘤与正常大肠粘膜间无统计学意义（P=0.222>0.05）;合并腺瘤和单纯腺瘤Livin-βmRNA的表达无明显差异（均数分别为0.5736,0.3115; P=0.223> 0.05）。Livinα/β值分别为:结直肠癌1.21±0.20,腺瘤0.77±0.12,正常大肠粘膜0.28±0.10,结直肠癌、腺瘤和正常大肠粘膜间比较均有统计学意义（P<0.05）。Caspase-3 mRNA相对含量分别为:结直肠癌0.38±0.20,腺瘤0.52±0.06,正常大肠粘膜0.81±0.16,结直肠癌与正常大肠粘膜比较有统计学意义（P=0.000<0.05）。合并腺瘤和单纯腺瘤Caspase-3 mRNA的表达无明显差异（均数分别为0.5929,0.4359,P=0.228>0.05）。Pearson相关分析: Livin-αmRNA与Caspase-3 mRNA呈弱负相关性（r=-0.128,P=0.614>0.05） ; Livin-βmRNA与Caspase-3 mRNA呈弱正相关性（r=0.225, P=0.369>0.05）;Livinα/β与Caspase-3 mRNA呈弱负相关性（r=-0.218,P=0.386> 0.05）。2免疫组化结果显示在结直肠癌、合并腺瘤、腺瘤和正常大肠粘膜中Livin蛋白阳性表达率分别为67.90%（55/81）、61.54%（8/13）、75.00%（9/12）、0.00%（0/40）;Caspase-3蛋白阳性表达率分别为40.74%（33/81）、69.23%（9/13）、58.33%（7/12）、87.50%（35/40）。Livin蛋白在高、中、低分化腺癌中的阳性表达率分别为69.23%（18/26）、72.22%（26/36）、57.89%（11/19）。Caspase-3蛋白在高、中、低分化腺癌中的阳性表达率分别为53.85%（14/26）、41.67%（15/36）、21.05%（4/19）。经统计学分析可知,结直肠癌原发灶中Livin的表达明显高于正常大肠粘膜（χ2 =42.52 P<0.05）,具有统计学意义;合并腺瘤和单纯腺瘤Livin的表达无明显差异（χ2=0.085 P>0.05）;结直肠癌原发灶和腺瘤中Livin的表达无明显差异（χ2=0 P>0.05）;腺瘤中Livin的表达明显高于正常大肠粘膜（χ2=29.52 P<0.05）,具有统计学意义;正常大肠粘膜中Caspase-3蛋白的表达明显高于结直肠癌原发灶中Caspase-3蛋白的表达（χ2=23.784 P<0.05）,具有统计学意义;合并腺瘤和单纯腺瘤Caspase-3的表达无明显差异（χ2=0.881 P>0.05）;腺瘤中Caspase-3蛋白的表达明显高于结直肠癌原发灶中Caspase-3的表达（χ2=4.158 P<0.05）;正常大肠粘膜中Caspase-3的表达明显高于腺瘤（χ2=5.027 P<0.05）,具有统计学意义;将结直肠癌原发灶中Livin和Caspase-3蛋白的表达情况与临床病理资料结合进行分析,发现患者的性别、年龄、分化程度、Dukes分期、浸润深度、有无淋巴结转移与结直肠癌原发灶中Livin和Caspase-3蛋白的表达情况无明显相关性（P>0.05）。Spearman等级相关分析提示Livin表达与Caspase-3表达呈负相关（r=-0.294,P=0.008<0.01）。结论:1 Livin蛋白在结直肠癌和腺瘤组织中表达明显高于正常大肠粘膜,提示Livin与结直肠癌和腺瘤的发生发展有关。2 Caspase-3在正常大肠粘膜、腺瘤和腺癌中的表达率依次降低,且组间差异有显著性（P<0.05）,提示Caspase-3表达降低与结直肠癌和腺瘤的发生发展有关。3 Livin和Caspase-3蛋白的表达与患者的性别、年龄、分化程度、Dukes分期、浸润深度、有无淋巴结转移无明显相关性4 Caspase-3蛋白在结直肠癌组织中被Livin抑制而表达降低,且与Livin的表达呈负相关。5 Livin-αmRNA在结直肠癌和腺瘤组织中表达明显高于正常大肠粘膜,提示Livin-αmRNA上调与结直肠癌和腺瘤的发生发展有关,并且是结直肠癌发生的早期分子事件。6 Livin-βmRNA在结直肠癌组织中表达明显低于正常大肠粘膜,提示Livin-βmRNA下调与结直肠癌的发生发展有关。7 Livinα/β的值在正常大肠粘膜、腺瘤和结直肠癌组织中逐步增大,提示Livin-α和Livin-β共同参与结直肠肿瘤的发生。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 Livin 和Caspase-3 在结直肠癌和腺瘤中的表达及其临床意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 Livin 与肿瘤的研究进展
• 致谢
• 个人简历