论文题目: PHA颗粒结合蛋白的表达、结晶与X射线衍射分析
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 赵明莲
导师: 陈国强
关键词: 聚羟基脂肪酸酯,颗粒表面结合蛋白,表达纯化,晶体生长,衍射分析
文献来源: 清华大学
发表年度: 2005
论文摘要: 新型生物材料聚羟基脂肪酸酯（简称PHA）,被称为“绿色塑料”,是细菌胞内积累的碳源和能源储存物,拥有生物可降解性、生物相容性、压电性等许多天然的优良性能。本研究的主要内容为:基于PHA 颗粒表面结合蛋白对聚酯生物合成起始过程的促进作用和稳定颗粒的功能,分别高效表达和结晶分析了位于聚羟基丁酸羟基己酸共聚酯（PHBHHx）颗粒表面的结合蛋白PhaPAh和PHB 颗粒结合蛋白PhaPRe;对高质量的大单晶PhaPAh进行了X 射线衍射分析。研究取得的主要结果: 1. 完成了两个不同种属（Aeromonas hydrophila 4AK4,Ralstonia eutropha H16） 来源的PHA 颗粒表面结合蛋白PhaPAh 和PhaPRe 的原核高效表达、蛋白质纯化与结晶优化实验; 2.获得了高质量的PhaPAh蛋白质大单晶,X 射线衍射分辨率达到2.8A|°,晶体空间群为P212121,晶胞参数为a =80.8|° , b =108.9|°, c =134.4|°, 晶体三维精细结构即将确定; PhaPRe晶体质量的改善还在进行中。
论文目录:
中文摘要
英文摘要(ABSTRACT)
目次页
第一章 序言
第二章 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌种和质粒
2.1.2 分子生物学常用的工具酶
2.1.3 分子操作常用试剂盒
2.1.4 常用生化试剂
2.1.5 分子量标准物
2.1.6 聚合酶链式反应(PCR)试剂
2.1.7 仪器和设备
2.2 实验方法
2.2.1 菌种保存方法
2.2.2 常用培养基的配制
2.2.3 分子生物学常用溶液及缓冲液的配制
2.2.4 分子生物学操作方法
2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
2.2.6 细菌、酵母总蛋白裂解液的制备
2.2.7 蛋白质亲和纯化与凝胶过滤层析
2.2.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.2.9 蛋白质含量的测定--紫外吸收法
2.2.10 相关蛋白质的生物信息学分析
2.2.11 蛋白质结晶方法—悬滴式扩散结晶法
第三章 蛋白质晶体学原理与结晶优化、数据收集分析
3.1 蛋白质的结晶原理和方法
3.2 蛋白质的均一性对结晶的影响
3.3 蛋白质的电泳分析
3.4 蛋白质的动态光散射性质研究
3.5 蛋白质结晶条件的筛选和优化
3.6 X-射线衍射数据收集和处理
第四章 PHA 聚酯颗粒表面结合蛋白的表达、纯化、结晶与衍射分析
4.1 引言
4.2 PhaP_(Ah) 的表达纯化、结晶优化与衍射分析
4.2.1 实验方法与流程
4.2.2 PHBHHx 颗粒结合蛋白PhaP_(Ah) 的实验结果
4.3 PhaP_(Re) 的高效表达、纯化与蛋白质结晶优化
4.3.1 实验方法与流程
4.3.2 PHB 颗粒结合蛋白PhaP_(Re)的实验结果
第五章 一种提高酵母菌甲醇耐受性的方法
附录
附录1 快速高效提取基因组DNA 的改良方法
附录2 蛋白质性质的相关生物信息学分析
附录3 GOR4 软件在线预测的Phasin 二级结构
附录4 Poster Abstract for ISBP2004
附录5 Poster Abstract for RECOMB2005
附录6 Abstract for National PHA Seminar (2005)
附录7 结晶筛选试剂(I) 配方
附录8 结晶筛选试剂(II) 配方
参考文献
致谢
个人简历及在站期间研究成果
发布时间: 2006-03-21
参考文献
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