论文摘要
Ghrelin是Kojima等人于1999年在人和小鼠的胃组织中发现的一种多肽，为生长激素促分泌素（Growth hormone secretagogue）受体（GHS-R）天然的内源性配体，能够促进生长激素（GH）释放，故命名为ghrelin。Ghrelin通过其受体发挥作用，具有促进GH分泌，调节能量平衡，刺激胃酸分泌，调节心血管活动，增强免疫应答，抗细胞增值，影响糖代谢，引起焦虑和改善记忆力，调节睡眠，维持睾丸正常功能等多种生物学作用。在人、鼠、羊、猪和鸡等动物有关ghrelin的研究报道较多，但未见有关兔ghrelin基因克隆和分布定位的报道。本文用免疫组织化学和RT-PCR方法开展了这方面的研究，结果如下：1．用免疫组织化学SP法研究了ghrelin在兔胃肠道内的分布。在胃内，免疫阳性细胞主要位于胃底腺区胃腺的颈部和底部，在贲门腺区和幽门腺区分布较少；在肠道，免疫阳性细胞分布于十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠的粘膜层，在肠腺和肠绒毛上皮分布较多。胃肠道的免疫阳性细胞分为“开放型”和“闭合型”2种，“开放型”细胞呈锥体型，顶部到达腔面；“闭合型”细胞呈圆形或椭圆形，顶部不到达腔面。胃肠道免疫阳性细胞分布密度以胃部最多，从胃到直肠逐渐减少，而“开放型”细胞所占比例沿胃肠道由近及远逐渐升高。2．用免疫组织化学SP法研究了ghrelin在兔中枢神经系统内的定位。结果显示，ghrelin免疫阳性细胞在下丘脑、大脑皮质、迷走神经背侧运动核和脊髓腹侧角内均有分布；在下丘脑分布于弓状核、腹内侧核、室旁核、背内侧核和外侧区。3．用RT-PCR研究了兔ghrelin基因的克隆及其mRNA在体内的表达。从兔胃中提取总RNA，根据Genbank上已发表的猪ghrelin mRNA序列设计合成引物，通过反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）进行cDNA扩增，获得了目的片段，随后将目的片段克隆于pMD18-T载体上，经大肠杆菌DH 5a转化鉴定正确后进行序列测定，得到326 bp目的片段，经验证分析该序列为兔ghrelin基因的部分片段，并将其登录在Genbank上，基因登录号为EF566009。随后对兔体内ghrelin基因的表达进行了研究，结果显示，ghrelin mRNA在兔大脑、下丘脑、垂体、脑干、脊髓、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、心、肝、脾、肺、肾、睾丸、卵巢和下颌腺等组织器官中均有表达，该结果与在其它动物上获得的结果基本相似，表明ghrelin在进化上是保守的。本文为深入研究ghrelin在兔体内的生理功能奠定了基础。