肿瘤抑制因子基因转染兔抑制血管再狭窄的实验研究

论文摘要

近年来,随着介入性心脏病学的迅速发展和广泛应用,经皮冠状动脉介入术（PCI）已在我国许多医院开展起来,这是值得可喜的。但是PCI后的主要长期并发症——冠状动脉再狭窄发生率较高,这也是目前开展冠心病（CHD）介入性治疗的主要障碍,严重地影响了PCI的长期疗效。在PCI术后再狭窄的形成机制中,“血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMC）的增殖及迁移学说”占有重要地位。药物治疗再狭窄的方法不是完全令人满意,所以积极探求防治再狭窄的新途径显得尤为重要。自90年代开始,一种新的治疗技术即基因治疗出现了,为人类研究现代治疗学开辟了新的道路。本研究的目的是通过对动脉平滑肌细胞进行体内、外实验转染PTEN基因,观察其对PDGF诱导的VSMC增殖（MTT）与信号传导通路的影响,以及对内皮损伤后内膜增生的影响,从而了解PTEN在防治再狭窄过程中的作用,以期得到更好的治疗方法。本实验成功构建了pcDNA4/myc-His-PTEN真核表达质粒,脂质体介导转染VSMC细胞,重组hPTEN基因修饰可抑制PDGF诱导的VSMC增殖；继而通过脂质体介导动脉腔内转染的方式证实PTEN对再狭窄有防治作用。本研究的创新性在于通过细胞实验及动物实验验证了PTEN可以抑制再狭窄。

论文目录

• 内容提要
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词表
• 第1篇 绪论
• 第1章 肿瘤抑制因子的研究进展
• 1 PTEN的概述
• 1.1 PTEN的发现
• 1.2 PTEN的分子结构特征
• 2 PTEN的信号传导途径及功能
• 2.1 PTEN的信号传导途径
• 2.2 PTEN的生物学功能
• 3 PTEN表达的调控
• 4 PTEN在心血管领域的研究
• 4.1 PTEN可抑制心肌肥厚
• 4.2 PTEN可调节心肌收缩功能
• 4.3 PTEN与血管成形术后再狭窄的关系
• 5 展望
• 第2章 介入治疗后再狭窄（RS）的基因治疗
• 1 基因治疗简介
• 2 RS形成机制
• 2.1 血管内皮细胞分泌功能紊乱,启动血管再狭窄
• 2.2 血管内皮损伤及功能紊乱,亚急性血栓形成
• 2.3 动脉内膜损伤,炎症反应参与
• 2.4 血管平滑肌细胞的激活、增生和迁移
• 2.5 血管重塑
• 3 RS的基因治疗
• 3.1 RS基因治疗的主要策略
• 3.2 RS基因治疗的技术难点
• 3.3 RS基因治疗的研究现状
• 4 展望
• 第2篇 正文
• 第1章 人肿瘤抑制因子真核表达质粒的构建
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 主要仪器
• 1.3 方法
• 2 结果
• 2.1 双酶切质粒及真核质粒电泳结果
• 2.2 连接产物酶切鉴定结果
• 2.3 DNA序列分析
• 2.4 鲎试剂检测分析
• 3 讨论
• 第2章 重组hPTEN基因修饰血管平滑肌细胞的制备及鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 VSMC细胞对G418的耐受试验
• 2.2 转染细胞的筛选
• 2.3 转染细胞PTEN表达的RT-PCR检测结果
• 2.4 转染细胞PTEN表达的免疫组化检测结果
• 3 讨论
• 第3章 重组hPTEN基因修饰对PDGF诱导的体外培养血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 pcDNA4/myc-His-PTEN转染对VSMC增殖的影响
• 2.2 RT-PCR检测结果
• 2.3 Western blot检测结果
• 3 讨论
• 第4章 人肿瘤抑制因子基因在兔腹主动脉内表达的实验研究
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 结果判定
• 1.4 计量方法
• 1.5 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 重组pcDNA4/myc-His-PTEN体内注射对腹主动脉转染效率
• 2.2 PTEN在腹主动脉内表达的观察
• 3 讨论
• 第5章 内皮剥脱诱发的兔RS模型的建立
• 1 材料和方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 造模结果
• 2.2 管形态学
• 3 讨论
• 第6章 重组hPTEN基因转染抑制兔RS的实验研究
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 病理形态学检测结果
• 3 讨论
• 第3篇 结论
• 参考文献
• 附录
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果
• 致谢