包埋脱水法冷冻保存裙带菜配子体的研究

论文摘要

本文以裙带菜配子体为实验材料,用包埋脱水法进行超低温和常低温保存。将裙带菜配子体包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,在超低温保存的过程中,研究了预培养中的蔗糖浓度和培养时间,脱水过程中的脱水速率和胶球含水量,以及化冻速度对配子体存活率和发育能力的影响;在常低温保存的过程中研究了,温度、含水量以及光照对配子体存活率的影响。　超低温保存的结果表明:　1 蔗糖浓度和预培养时间对配子体存活率的影响　将含裙带菜配子体的胶球分别在0.2　mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.5mol/L的蔗糖培养基中培养3h、6h、9h、12h,蔗糖预培养对配子体的存活率影响很大,胶球在0.3mol/L的蔗糖培养基中培养9　h 可以获得较高的存活率。　2 胶球最适平均脱水速率对配子体存活率的影响　配子体包埋后分别以含水量每小时减少1%、2.5%、5%、8%、10%、15%、25%的平均脱水速率脱水,结果裙带菜配子体在平均脱水速率5%时获得的存活率最高。　3 胶球含水量对配子体存活率的影响　以5%含水量/h 的脱水速率进行脱水,使胶球的含水量为15%、25%、35%、45%、55%、65%、85%,结果胶球在最后含水量为25%的时候获得了最高的存活率。　4 化冻温度对配子体克隆的存活率　化冻温度对配子体存活率的影响很大,研究表明,配子体在冻存管化冻时随着化冻温度的提高存活率提高,而在溶液中化冻时当化冻温度达到25℃时配子体的存活率最高,当温度再升高时存活率开始下降,即溶液化冻的温度为25℃时配子体存活率为最高(73%)。　在优化条件下配子体存活率可高达73%;经过冷冻保存的裙带菜配子体在适合发育的条件下能够正常形成孢子体。　常低温保存的结果表明:　裙带菜配子体在不同温度、不同含水量下的存活率有很大差别。胶球的含水量为50%时在4℃的条件下配子体的存活率最好。胶球保存180 天后配子体的存活率仍然在90%以上。

论文目录

• 摘要
• 前言
• 一 综述
• 1 植物种质保存的目的及意义
• 1.1 植物种质超低温保存的目的意义
• 1.2 藻类种质超低温保存的目的意义
• 2 植物种质超低温保存的原理及主要方法
• 2.1 植物种质超低温保存的原理
• 2.1.1 植物种质超低温保存的原理及理论基础
• 2.1.2 超低温保存对生物有机体伤害的某些因素
• 2.1 2.1 冷却过程细胞受到的伤害
• 2.1.2.2 复温过程细胞受到的损伤
• 2.1.2.3 抗冻保护剂的种类、浓度及其加入取走的方式
• 2.1.2.4 细胞因素
• 2.1.2.5 存活率的鉴定
• 2.2 植物种质超低温保存的方法
• 2.2.1 快速冷冻法（ 一步冷冻法）
• 2.2.2 控速降温冷冻法
• 2.2.3 玻璃化冷冻法
• 2.2.4 包埋脱水法
• 2.4.5 不同方法的结合使用
• 3 植物种质超低温保存的研究进展
• 3.1 高等动、植物种质超低温保存研究的进展
• 3.2 藻类种质超低温保存研究的进展
• 二 材料和方法
• 1 材料来源及其培养
• 2 主要仪器设备和主要试剂的配制
• 2.1 主要仪器设备
• 2.2 重要试剂及配制
• 3 实验方法
• 3.1 包埋
• 3.2 蔗糖预培养
• 3.3 脱水及含水量的测定
• 3.4 冰冻和化冻
• 3.5 化冻后的恢复、再培养和存活率的测定
• 3.5.1 化冻后的恢复和再培养
• 3.5.2 存活率的测定
• 3.6 发育能力的观测
• 三 结果与讨论
• 1 蔗糖浓度和预培养时间对裙带菜配子体存活率的影响
• 2 脱水速率和含水量对裙带菜配子体存活率的影响
• 3 化冻方法对裙带菜配子体冷冻保存存活率的影响
• 4 冷冻保存后裙带菜配子体的存活率和发育能力的观测
• 四结论
• 五 常低温保存
• 1 结果与讨论
• 1.1 含水量对裙带菜配子体存活串的影响
• 1.2 温度对配子体存活率的影响
• 1.3 光照对裙带菜配子体存活率的影响
• 1.4 冷冻保存后裙带菜配子体的存活率和发育能力的观测
• 2 结论
• 参考文献
• Abstract
• 致谢
• 独创性声明
• 学位论文版权使用授权书