粉尘螨疫苗对粉尘螨变应原诱导的小鼠气道变态反应炎症的影响及其机制研究

论文摘要

目的:通过对哮喘模型小鼠鼻腔免疫标准化粉尘螨疫苗进行治疗,探讨标准化粉尘螨疫苗对粉尘螨变应原诱导的变态反应性气道炎症的免疫保护作用,探讨标准化粉尘螨疫苗在支气管哮喘抗原特异性免疫治疗中的机制。方法:1、21只4～6周龄SPF级Balb/c小鼠分成正常对照组、哮喘模型组、标准化粉尘螨疫苗治疗组。正常对照组不做处理。用粉尘螨变应原提取液诱发哮喘制作哮喘小鼠模型,哮喘小鼠模型制作成功后用标准化粉尘螨疫苗（400μg）在小鼠麻醉状态下行鼻腔免疫,连续免疫8次,每次间隔1天,免疫结束1周以后,用50μg/50μl Der f变应原滴鼻激发,每天1次,连续7次。2、各组小鼠气管插管进行支气管肺泡灌洗,观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数和细胞分类;各组小鼠取肺组织,通过HE染色（haematoxylin and eosin）观察小鼠肺部炎症变化。3、各组小鼠用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中IgE、IgA和IgG2a抗体;检测肺泡灌洗液中IL-10、IL-4和IFN-γ水平;同时检测脾细胞在变应原特异刺激下分泌的IL-10、IL-4和IFN-γ水平。4、各组小鼠用MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应。5、各组小鼠用流式细胞仪检测脾淋巴细胞中的调节性T细胞数量。6、各组小鼠均分别用PBS测基础值,以1mg/ml、10mg/ml、30mg/ml、50mg/ml、100mg/ml浓度的乙酰甲胆碱激发,观察气道高反应性Penh值的变化。结果:1、哮喘模型组小鼠激发后可见咳嗽、喘息、呼吸加深加快,烦躁不安等症状;标准化粉尘螨疫苗治疗组激发后也可见类似症状和体征,但明显减轻。2、正常对照组小鼠肺部无病理改变;哮喘模型组肺部出现明显的变态反应性炎症;标准化粉尘螨疫苗治疗组肺部变态反应性炎症较哮喘模型组明显减轻。哮喘模型组小鼠肺泡灌洗液细胞总数为（159.60±15.08）、嗜酸性粒细胞数为（33.20±3.76）;标准化粉尘螨疫苗治疗组肺泡灌洗液细胞总数为（101.00±5.32）、嗜酸性粒细胞数为（18.40±2.14）。哮喘小鼠在标准化粉尘螨疫苗治疗后肺泡灌洗液细胞总数和嗜酸性粒细胞数都有所下降,标准化粉尘螨疫苗治疗组与模型组比较有统计学意义（P<0.01）。3、哮喘模型组肺泡灌洗液中的IL-4、IL-10和IFN-γ分别为（57.30±5.02 pg/ml）、（52.5±2.66pg/ml）和（53.80±1.00 pg/ml）,与之相比,标准化粉尘螨疫苗治疗组肺泡灌洗液中的IL-4、IL-10和IFN-γ分别为（32.00±4.42 ）、（135.25±1.04）、（117.00±8.43）,标准化粉尘螨疫苗治疗组IL-4显著降低（P<0.01）,IL-10和IFN-γ都显著升高（P<0.01）。4、哮喘模型组脾细胞悬液中IL-10、IL-4和IFN-γ水平分别为（47.35±4.85）、（169.25±16.80）、（40.00±5.35）;标准化粉尘螨疫苗治疗组脾细胞悬液中IL-10、IL-4和IFN-γ水平分别为（65.75±5.33）、（83.25±3.71）、（76.00±7.12）;标准化粉尘螨疫苗治疗组各参数与模型组比较有显著差异（P<0.01）。5、与模型组相比,标准化粉尘螨疫苗治疗组脾淋巴细胞增殖受到抑制（P<0.01）。6、与模型组相比,标准化粉尘螨疫苗治疗组小鼠能明显诱导调节性T细胞数量增加（P<0.01）。7、与模型组相比,标准化粉尘螨疫苗治疗组小鼠治疗后,气道高反应性明显降低,有显著差异（P<0.01）。结论:标准化粉尘螨疫苗鼻腔免疫治疗能够诱导调节性T细胞,诱导Th1为主的免疫应答,有效抑制变应原诱导的气道高反应性、过敏性气道炎症和血清IgE抗体的产生。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 各组小鼠症状和体征的改变
• 3.2 肺部切片 HE 染色
• 3.3 肺泡灌洗液（BALF）细胞计数和染色观察
• 3.4 小鼠气道高反应测试观察
• 3.5 ELISA测定血清中Der f特异性IgE、IgA与IgG2a抗体水平
• 3.6 ELISA 测定肺泡盥洗液中 IL-4、IL-10 与 IFN-γ
• 3.7 ELISA 测定脾细胞抗原特异性 IL-4、IL-10 与 IFN-γ
• 3.8 MTT 法测定脾淋巴细胞增殖反应
• +CD25⁺Foxp3 调节性 T 细胞数量'>3.9 流式细胞仪检测 CD4⁺CD25⁺Foxp3 调节性 T 细胞数量
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果