论文摘要
研究背景与目的高脂血症的发病率在不断增加,时刻威胁着我们健康。高脂血症主要是以血浆中胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白升高,高密度脂蛋白降低为表现的一种血脂代谢紊乱的状态。胆固醇代谢紊乱能给机体带来严重的不良影响,血浆胆固醇含量增高是引起动脉粥样硬化的主要因素,动脉粥样硬化斑块中含有大量胆固醇,从而促使胆固醇在血管壁中堆积,由此可引起一系列心血管疾病[¨。目前虽多种西药有很明显的降血脂作用,但长期服用均有不同程度的副作用[2]。学者们通过对中医药方面的研究,力求找出一种安全、可靠、有效的降低血脂的植物性天然药物。许多学者研究植物性药物降血脂,并同时进行了长期大量的实验研究,也不断的有新的进展和发现[3]o本实验通过体外降血脂实验筛选复合轮叶党参（Composite Codonopsis Lanceolata, CCL）最佳配方,同时根据优选发酵最佳条件,发酵复合轮叶党参。发酵复合轮叶党参（fermented Composite Codonopsis Lonceoloata, FCCL）和未发酵复合轮叶党参（non-fermented Composite Codonopsis Lonceoloata, NCCL）进行对比实验发现FCCL的降血脂效果更佳。最后通过体内降血脂实验,探讨CCL对降血脂的预防作用及其作用机制。方法①分别提取轮叶党参、洋葱皮、枸杞子。通过L9（34）正交设计试验,根据CCL提取物对体外细胞内、外TC的浓度影响值,选择出CCL最佳配方组合[4-71。②根据吸收成分的血清药理学实验,取9只大鼠,根据L9（34）正交设计试验配置9组CCL不同组方的药液,按一次灌胃0.5（g/kg·bw、以生药材计）的浓度的5倍,连续灌胃5 d,末次给药后2 h,无菌条件下眼眶取血,分离收集大鼠血清。将9组大鼠的血清,按组别依次加入培养对数期的HepG2细胞（2×105个/mL）培养液内,并设空白对照组（含10%的胎牛血清）,模型对照组（含50%的胎牛血清）。③体内降血脂实验,按总TC的浓度结果随机分成6组,即正常对照组、模型对照组、CCL高、中、低剂量组（0.0625、0.125、0.5g/kg·bw以生药材计）、辛伐他汀组（10 mg/kg）。正常对照组、模型对照组灌胃蒸馏水（1 mL/mg）; CCL高、中、低剂量组分别灌胃等量不同浓度的提取液；辛伐他汀组灌胃等量的辛伐他汀水溶液。连续灌胃4 w,每周称重2次,根据体重调整给药量。末次给药后禁食12 h,不限饮水,乙醚麻醉摘眼球取血,颈椎脱臼处死。测定血清TC、TG、 LDL-C、HDL-C。④CCL活性干酵母发酵条件筛选,采用L9（34）正交设计方法,以总黄酮的含量为观察指标,优选出发酵提取CCL的最佳条件。分别将FCCL、 NCCL乙醇提取物,过D101大孔吸附树脂柱[13-141并精制提取物,根据具体测定步骤分别测定FCCL、 NCCL的乙醇提取物中的总黄酮和总皂苷的含量。⑤油红O染色实验,分别配置FCCL、 NCCL乙醇提取物的各实验浓度,加入到对数期的张氏肝细胞培养液内,培养48 h,观察细胞内脂滴多少。⑥FCCL体内降血脂作用,将大鼠乙醚麻醉,尾部取血,按TC结果随机分组成6组,即正常空白对照组、模型对照组、FCCL[15-19]低、中、高剂量组（0.0625、0.125、 0.5g/kg·bw以生药材计）、辛伐他汀组（10 mg/kg）。正常对照组、模型对照组灌胃蒸馏水（1 mL/mg）; FCCL高、中、低剂量组分别灌胃不同浓度等量的提取液；辛伐他汀组灌胃等量的辛伐他汀水溶液。连续灌胃6W,每周称重2次,根据体重调整给药量。末次给药后禁食12 h,不限饮水；乙醚麻醉,摘眼球取血,颈椎脱臼处死,迅速取出肝脏。酶比色法测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、HMG-CoA、 LCAT。动物肝脏匀浆,取上清液待测。并根据试剂盒测定肝匀浆中的NO、NOS、iNOS含量。结果①结合本课题组前期的研究结果,可确定于三种原料提取物的最佳配方筛选的质量浓度为轮叶党参0、100、200μg/mL;洋葱皮0、20、40μg/mL;枸杞子0、40、80μg/mL。②质量浓度的最佳配比为：轮叶党参提取物200μg/mL、洋葱皮提取物40μg/mL及枸杞子提取物40μg/mL,加入此组方的培养液胆固醇含量最低。因此CCL的最佳配方组成为轮叶党参提取物200μg/mL、洋葱皮提取物40 μg/mL及枸杞子提取物40μg/mL,轮叶党参、洋葱皮、枸杞子三种提取物的混合比例为5：1： 1③CCL体内降血脂实验结果显示,CCL低、中、高剂量组的血清TC浓度明显低于模型对照组,差异具有统计学意义（P<0.05、 P<0.01）; CCL高、中、低剂量组的血清LDL-C浓度明显低于模型对照组,差异具有显著性统计学意义（P<0.01）。临床一线降血脂药物辛伐他汀邛日性对照组的血清TC、LDL-C均显著低于模型组（P<0.01）。④CCL活性干酵母最佳条件筛选,活性干酵母加入量为8g、葡萄糖加入量为20 g、发酵时间为3 d,提取物中的总黄酮的含量最高。FCCL与NCCL低、中、高剂量组均比模型对照组细胞内脂滴明显少,并且FCCL与NCCL高剂量组的细胞内脂滴最少。结果表明,FCCL高剂量组比NCCL的高剂量组减少细胞内脂滴含量的效果更好。⑤FCCL乙醇提取物体内大鼠实验结果显示,FCCL乙醇提取物有明显的降低血脂的作用,根据实验数据显示FCCL高剂量组调血脂的效应与临床一线降血脂药物辛伐他汀接近。结论（1）轮叶党参、枸杞子及洋葱皮提取物体外降血脂的最佳组合浓度为：轮叶党参提取物200 μg/mL、洋葱皮提取物40 μg/mL及枸杞子提取物40μg/mL,轮叶党参、洋葱皮、枸杞子三种提取物的混合比例为5：1：1。（2）CCL内降血脂作用的最佳剂量为0.5g/kg·bw。（3）CCL在活性干酵母为2%、葡萄糖加入量为5%、发酵时间为3 d时总黄酮和总皂苷含量显著增高,降血脂作用增强。（4）FCCL提取物可抑制胆固醇合成限速酶。