人用猪源性生物制品中猪细小病毒检测方法的建立

论文题目: 人用猪源性生物制品中猪细小病毒检测方法的建立

论文类型: 硕士论文

论文专业: 免疫学

作者: 吴淑芳

导师: 贺争鸣

关键词: 猪细小病毒,单克隆抗体,血清学,检测

文献来源: 中国药品生物制品检定所

发表年度: 2005

论文摘要: 为保证人用猪源性生物制品的的质量和安全性，有必要对潜在污染的相关病毒进行检测。本论文旨在建立猪细小病毒（PPV）的分子生物学及血清学检测方法，并对相关生物材料进行检测。通过GeneBank查出所有已发表的PPV基因组序列，其它细小病毒科细小病毒属病毒及其它猪源性病毒基因组序列，利用DNAStar软件进行序列同源性分析，利用Primer primier5.0及Oligo6.0引物设计软件按照引物设计原则设计一对针对PPV的特异引物，能够扩增出一条531bp的特异片段，经方阵滴定法确定了PCR检测的最佳条件，经过寡核苷酸探针对PCR产物进行斑点杂交鉴定，并对特异片段连接pGEM-T-easy载体，通过对于重组质粒测序结果进行软件分析证明为PPV的特异片段。对已知TICD50为103.6的病毒培养物提取模板以10倍等级倍比稀释，进行PCR扩增，以鉴定PCR方法的敏感性，我们建立的PCR方法所能检测的最小TCID50值为0.398。通过对来自北京各大屠宰场的猪源性脏器及建立的PPV—猪肾组织混合感染PK-15细胞模型进行检测，进行PCR检测方法验证。将以PK-15细胞为宿主大量培养的PPVAV7909株通过蔗糖密度梯度离心进行纯化后获得的PPV抗原，免疫五只6-8周龄雌性BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备单克隆抗体，经HAT、HT选择培养，有限稀释法克隆，经3-4次克隆，共获得7株稳定分泌抗体的单克隆细胞株，经过IFA、WB及HI等方法鉴定其特异性，发现此七株抗体并非针对PPV，而是针对PK-15细胞抗原的单克隆抗体，分析其原因，很可能是因为免疫和检测抗原纯度不够(混杂有PK-15细胞成

论文目录:

一中文摘要

二 Abstract

三前言

四第一部分猪细小病毒 PCR检测方法的建立

材料与方法

实验结果

猪细小病毒 PCR检测方法的初步应用

分析与讨论

小结

五第二部分猪细小病毒单克隆抗体的制备及鉴定

材料与方法

实验结果

分析与讨论

小结

六第三部分猪细小病毒血清学检测方法的建立

材料与方法

实验结果

分析与讨论

小结

七参考文献

八附录1:文献综述

九附录2:英文缩略词表

十致谢

发布时间: 2007-03-20

参考文献

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人用猪源性生物制品中猪细小病毒检测方法的建立

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