青霉PT95菌株的鉴定、菌核分化和产生类胡萝卜素的研究

论文题目: 青霉PT95菌株的鉴定、菌核分化和产生类胡萝卜素的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 韩建荣

导师: 袁静明

关键词: 青霉菌株,鉴定,菌核分化,菌核生物量,类胡萝卜素产率,诱导子,氧胁迫,抗氧化剂,谷物培养基,固态发酵

文献来源: 山西大学

发表年度: 2005

论文摘要: 从山西汾阳混交林土壤中分离到一株能在菌核内积累类胡萝卜素的青霉PT95菌株。分别观察了PT95菌株在查氏酵母膏琼脂（CYA）、麦芽汁琼脂（MEA）、25%甘油硝酸盐琼脂（G25N）和查氏琼脂（CA）上的菌落特征和个体形态特征。结果表明:PT95菌株在CYA培养基上25℃培养7d后能形成由大量的菌核和少量分生孢子构成的菌落,菌落表面呈放射状的沟纹和皱缩;菌核区颜色为粉红色,后变为深红色,产孢区颜色为青灰色;菌核球形或不规则形,直径约300μm;帚状枝为严格单轮生,分生孢子梗生自基质或气生菌丝;菌丝分枝较少;瓶梗3～8个轮生,安瓿形,排列较紧密,8μm～10μm×1.5μm～2.5μm;分生孢子椭圆形,长轴2.5μm～3.0μm。在CYA培养基上37℃不生长,5℃偶尔生长。经检索,PT95菌株属于汤姆青霉系。 比较了CTAB、SDS-CTAB和氯化苄这3种DNA提取方法提取青霉DNA的效果。实验结果表明:CTAB法和SDS-CTAB法只能适合于部分青霉菌株的DNA提取。另外一些菌株则提取不出谱带清晰的DNA。而氯化苄法适合于供试的所有青霉菌株的DNA提取,所有菌株的DNA凝胶电泳图谱带清晰,效果很好。同时研究比较了液氮研磨和提取液的pH值对氯化苄法提取DNA效果的影响。 运用RAPD技术对PT95菌株、4株PT95的突变株和6株标准青霉菌株进行了比较。从70个10bp引物中筛选出13个有效引物,用于所有供试菌株基因组DNA样品的扩增。这13个引物对11株供试菌株均能扩增出清晰的谱带。对RAPD结果进行聚类分析,构建了各供试菌株基因型的亲缘关系图。从聚类图上可以看出,PT95菌株与同属汤姆青霉系的3种标准菌聚为一类,而产黄青霉、娄地青霉和嗜松青霉聚为另一类,这与形态分类的结果相一致。但PT95菌株在电泳图谱上与汤姆青霉系的3种已知标准菌均有一定的差异,根据聚类图可以清楚地将PT95菌株与其他菌株分开,这说明PT95菌株不同于任一汤姆青霉系的已知菌,很可能是一新种,有待进一步研究。 初步研究了氧胁迫和外源β-胡萝卜素对青霉PT95菌株菌核分化和类胡萝卜素产率的影响。在本实验中,光照和培养基中加Fe3+作为高氧胁迫的培养条件,黑暗作为低氧胁迫的培养条件。结果表明,在培养基

论文目录:

第一章 文献综述

1 类胡萝卜素研究进展

1.1 类胡萝卜素的结构

1.2 类胡萝卜素的功能与用途

1.3 产生类胡萝卜素的微生物

1.4 类胡萝卜素生物合成的遗传工程研究

2 丝状真菌的菌核及其研究进展

2.1 菌核的概念、结构和发生

2.2 菌核的发育

2.3 影响菌核发生的物理、化学和生物因素

2.4 菌核的起源

3 青霉及其分类研究

3.1 青霉的分类历史和分类方法

3.2 现代分子生物学分类方法

3.3 RAPD分析

4 固态发酵研究进展

4.1 底物(基质)研究

4.2 过程控制参数

5 本研究的目的、意义及主要内容

参考文献

第二章 青霉PT95菌株的形态观察

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 培养基

1.3 实验方法

2 结果

3 结论和讨论

参考文献

第三章 青霉总DNA提取方法比较

1 材料与方法

1.1 供试菌株

1.2 培养方法

1.3 试剂

1.4 主要仪器设备

1.5 DNA提取方法

2 结果和讨论

2.1 CTAB法提取DNA

2.2 SDS-CTAB法提取DNA

2.3 氯化苄法提取DNA

2.4 提取液的pH值对提取效果的影响

2.5 液氮研磨对提取结果的影响

参考文献

第四章 PT95菌株和其它青霉菌株的RAPD分析

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 试剂

1.3 PCR扩增反应

2 结果

2.1 引物筛选及RAPD标记多态性

2.2 聚类分析

2.3 PT95菌株的分类地位

参考文献

第五章 氧胁迫和外源β-胡萝卜素对青霉PT95菌株菌核分化和类胡萝卜素产率的影响

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 培养基

1.3 固态培养

1.4 液态培养

1.5 类胡萝卜素的提取和含量测定

1.6 脂质过氧化水平的测定

1.7 蛋白质浓度测定

2 结果

2.1 PT95菌株分化发育情况

2.2 氧胁迫对PT95菌株的菌核生物量和色素产率的影响

2.3 不同氧胁迫培养条件的比较

2.4 外源β-胡萝卜素对PT95菌株菌核分化的影响

2.5 外源β-胡萝卜素对PT95菌株菌核中色素含量的影响

2.6 外源β-胡萝卜素对PT95菌株脂质过氧化水平的影响

3 讨论

参考文献

第六章 抗坏血酸与青霉PT95菌株菌核分化和脂质过氧化的关系

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 主要化学试剂

1.3 培养基

1.4 实验方法

1.5 抗坏血酸含量测定

1.6 脂质过氧化水平的测定

1.7 蛋白质浓度测定

2 结果

2.1 PT95菌株在Joham's培养基上的分化发育情况

2.2 PT95菌株在Joham's培养基上不同发育时期的抗坏血酸含量

2.3 PT95菌株在Joham's培养基上不同发育时期的脂质过氧化水平

2.4 外源抗坏血酸对PT95菌株菌核分化的影响

2.5 外源抗坏血酸对PT95菌株脂质过氧化水平的影响

3 结论

4 讨论

参考文献

第七章 无机盐和碳氮源对青霉PT95菌株类胡萝卜素产率的影响

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 培养基

1.3 实验方法

1.4 菌核生物量的测定

1.5 类胡萝卜素的提取及含量测定

1.6 类胡萝卜素组分分离

1.7 β-胡萝卜素的测定

1.8 统计学处理

2 结果与分析

2.1 无机盐对菌核生物量和类胡萝卜素产率的影响

2.2 碳源对菌核生物量和类胡萝卜素产率的影响

2.3 氮源对菌核生物量和类胡萝卜素产率的影响

2.4 碳源和氮源浓度对菌核生物量和类胡萝卜素产率的影响

2.5 碳源和氮源对PT95菌株类胡萝卜素成分的影响

3 讨论

参考文献

第八章 几种诱导子对青霉PT95菌株固态发酵产生类胡萝卜素的影响

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 诱导子的制备

1.3 固态发酵

1.4 菌核生物量测定

1.5 类胡萝卜素的提取及含量测定

1.6 类胡萝卜素组分分离

1.7 β-胡萝卜素的测定

1.8 统计学处理

2 结果与讨论

2.1 诱导子对PT95菌核生物量的影响

2.2 诱导子对PT95菌核中的类胡萝卜素含量的影响

2.3 诱导子对PT95菌株类胡萝卜素产率的影响

2.4 诱导子对β-胡萝卜素在色素中的百分含量的影响

2.5 诱导子对PT95菌株产生分生孢子的影响

3 结论

参考文献

第九章 青霉PT95菌株利用谷物进行类胡萝卜素固态发酵的研究

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 接种物的准备

1.3 固态发酵培养基

1.4 固态发酵方法

1.5 菌核生物量测定

1.6 类胡萝卜素的提取及含量测定

1.7 类胡萝卜素组分分离

1.8 β-胡萝卜素的测定

1.9 统计学处理

2 结果

2.1 接种方式和接种量对PT95菌株菌核生物量和类胡萝卜素含量的影响

2.2 谷物培养基对PT95菌株菌核生物量和类胡萝卜素产率的影响

2.3 添加麸皮对PT95菌株菌核生物量和类胡萝卜素产率的影响

2.4 谷物培养基对PT95菌株类胡萝卜素成分的影响

3 讨论

参考文献

附录

1 攻读博士学位期间参加的相关课题

2 攻读博士学位期间发表的相关论文

致谢

承诺书

发布时间: 2005-08-31

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