本文主要研究内容
作者肖荣（2019）在《牛AAMDC基因选择性多聚腺苷酸化及其转录后调控机制研究》一文中研究指出：转录后调控,包括mRNA的加工、转运、定位、转换以及翻译,是调控基因表达的重要环节。最近几年,越来越多的证据表明选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation,APA)通过产生不同长度3’UTR(3’untranslated region,3’UTR)变异体,在转录后水平调控基因表达。APA对mRNA的定位、稳定性及翻译效率有重要影响。牛AAMDC(Adipogenesis associated Mth938 domain containing)基因位于29号染色体上,包含4个外显子,编码122个氨基酸,结构域分析表明AAMDC包含一个Mth938结构域。该结构域是由热自养甲烷杆菌基因组编码的一种未知蛋白结构域,其功能尚未明确。目前影响AAMDC基因的转录后调控事件也有待阐明。本研究利用3’RACE对牛AAMDC基因变异体进行了克隆与鉴定。首先,通过双荧光素酶实验探究AAMDC不同的3’UTR对蛋白表达的影响。其次,构建并转染表达载体,检测不同的3’UTR对mRNA稳定性及翻译效率的影响。然后,利用Western blot和qRT-PCR方法进行了AAMDC基因与microRNAs(miRNAs)相互作用的探究。最后,分析了AAMDC长短变异体在牛前脂肪细胞分化过程的表达谱及其对牛前脂肪细胞分化的影响。主要研究结果如下:(1)通过APA和可变剪接(Alternative splicing,AS),牛AAMDC基因产生三种不同的变异体。其GenBank登录号分别为:MK576046,MK576047和MK576048。(2)双荧光素酶实验表明AAMDC长短3’UTR有不同的调控能力,短3’UTR能够促进蛋白表达。(3)将过表达载体转染到HEK293细胞中,qRT-PCR和Western blot结果表明短变异体的mRNA稳定性及翻译效率显著高于其他变异体。(4)miR-2428和miR-664a能够直接与长变异体的3’UTR结合并抑制其表达,表明由APA介导的3’UTR变短使AAMDC短变异体缺少了miR-2428和miR-664a的结合位点,从而逃避了miRNA的抑制作用。(5)利用qRT-PCR分析了AAMDC长短变异体在牛脂肪细胞分化过程中的表达谱,结果表明随着脂肪分化,AAMDC长短变异体及长变异体的表达量不断增高。将长短变异体转染到牛前脂肪细胞中,油红O染色和qRT-PCR结果表明AAMDC短变异体能够促进牛前脂肪细胞分化。总之,本研究阐明了一个新的由APA和miR-2428和miR-664a调节AAMDC的转录后调控机制。同时表明AAMDC短变异体能够促进牛前脂肪细胞分化,为进一步探究AAMDC的生理功能和脂肪生成的机制提供了坚实的理论基础。
Abstract
zhuai lu hou diao kong ,bao gua mRNAde jia gong 、zhuai yun 、ding wei 、zhuai huan yi ji fan yi ,shi diao kong ji yin biao da de chong yao huan jie 。zui jin ji nian ,yue lai yue duo de zheng ju biao ming shua ze xing duo ju xian gan suan hua (alternative polyadenylation,APA)tong guo chan sheng bu tong chang du 3’UTR(3’untranslated region,3’UTR)bian yi ti ,zai zhuai lu hou shui ping diao kong ji yin biao da 。APAdui mRNAde ding wei 、wen ding xing ji fan yi xiao lv you chong yao ying xiang 。niu AAMDC(Adipogenesis associated Mth938 domain containing)ji yin wei yu 29hao ran se ti shang ,bao han 4ge wai xian zi ,bian ma 122ge an ji suan ,jie gou yu fen xi biao ming AAMDCbao han yi ge Mth938jie gou yu 。gai jie gou yu shi you re zi yang jia wan gan jun ji yin zu bian ma de yi chong wei zhi dan bai jie gou yu ,ji gong neng shang wei ming que 。mu qian ying xiang AAMDCji yin de zhuai lu hou diao kong shi jian ye you dai chan ming 。ben yan jiu li yong 3’RACEdui niu AAMDCji yin bian yi ti jin hang le ke long yu jian ding 。shou xian ,tong guo shuang ying guang su mei shi yan tan jiu AAMDCbu tong de 3’UTRdui dan bai biao da de ying xiang 。ji ci ,gou jian bing zhuai ran biao da zai ti ,jian ce bu tong de 3’UTRdui mRNAwen ding xing ji fan yi xiao lv de ying xiang 。ran hou ,li yong Western blothe qRT-PCRfang fa jin hang le AAMDCji yin yu microRNAs(miRNAs)xiang hu zuo yong de tan jiu 。zui hou ,fen xi le AAMDCchang duan bian yi ti zai niu qian zhi fang xi bao fen hua guo cheng de biao da pu ji ji dui niu qian zhi fang xi bao fen hua de ying xiang 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :(1)tong guo APAhe ke bian jian jie (Alternative splicing,AS),niu AAMDCji yin chan sheng san chong bu tong de bian yi ti 。ji GenBankdeng lu hao fen bie wei :MK576046,MK576047he MK576048。(2)shuang ying guang su mei shi yan biao ming AAMDCchang duan 3’UTRyou bu tong de diao kong neng li ,duan 3’UTRneng gou cu jin dan bai biao da 。(3)jiang guo biao da zai ti zhuai ran dao HEK293xi bao zhong ,qRT-PCRhe Western blotjie guo biao ming duan bian yi ti de mRNAwen ding xing ji fan yi xiao lv xian zhe gao yu ji ta bian yi ti 。(4)miR-2428he miR-664aneng gou zhi jie yu chang bian yi ti de 3’UTRjie ge bing yi zhi ji biao da ,biao ming you APAjie dao de 3’UTRbian duan shi AAMDCduan bian yi ti que shao le miR-2428he miR-664ade jie ge wei dian ,cong er tao bi le miRNAde yi zhi zuo yong 。(5)li yong qRT-PCRfen xi le AAMDCchang duan bian yi ti zai niu zhi fang xi bao fen hua guo cheng zhong de biao da pu ,jie guo biao ming sui zhao zhi fang fen hua ,AAMDCchang duan bian yi ti ji chang bian yi ti de biao da liang bu duan zeng gao 。jiang chang duan bian yi ti zhuai ran dao niu qian zhi fang xi bao zhong ,you gong Oran se he qRT-PCRjie guo biao ming AAMDCduan bian yi ti neng gou cu jin niu qian zhi fang xi bao fen hua 。zong zhi ,ben yan jiu chan ming le yi ge xin de you APAhe miR-2428he miR-664adiao jie AAMDCde zhuai lu hou diao kong ji zhi 。tong shi biao ming AAMDCduan bian yi ti neng gou cu jin niu qian zhi fang xi bao fen hua ,wei jin yi bu tan jiu AAMDCde sheng li gong neng he zhi fang sheng cheng de ji zhi di gong le jian shi de li lun ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自聊城大学的肖荣，发表于刊物聊城大学2019-09-30论文，是一篇关于选择性多聚腺苷酸化论文,翻译效率论文,脂肪细胞分化论文,聊城大学2019-09-30论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自聊城大学2019-09-30论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。