苜蓿总黄酮的提取方法、药效以及多种豆科牧草次生代谢产物的研究

论文摘要

苜蓿、小冠花、百脉根、红豆草、鹰嘴紫云英、白三叶、黄花草木樨等优质豆科牧草含有丰富的次生代谢产物。本文以这几种豆科牧草为试验材料,对其总黄酮和总皂苷的积累规律进行了研究。同时为充分利用苜蓿中的黄酮类物质,提高苜蓿的经济附加值,分别采用微波和超声波辅助技术提取苜蓿总黄酮,对影响提取量的乙醇浓度、固液比、作用时间、微波功率、超声波温度、提取次数等进行了单因素试验,并在此基础上对各因素的互作效应进行了4因素3水平的正交试验。从而确定了最佳提取工艺,用于生产中提取苜蓿总黄酮。采用柱层析等多种分离手段对苜蓿活性成分进行了分离。并对苜蓿粗提液的药效进行了研究。为建立科学合理的牧刈制度,高效提取天然活性成分,为综合利用优质牧草提供指导依据。研究结果表明:微波辅助技术提取苜蓿总黄酮优选条件为:40%乙醇、1:30固液比,在500W功率下作用60s。这个工艺提取条件温和,温度不超过50℃;节能,耗电量只有0.008千瓦时;省时,提取时间只有超声波法的1/9,冷浸法的1/540;节约有机溶剂,同时无噪音污染。小冠花、百脉根、红豆草、紫云英、草木樨、白三叶6种豆科牧草的总黄酮含量普遍高于甘农3号、新疆大叶、低纤维苜蓿和白花苜蓿;而总皂苷含量整个生育时期均低于苜蓿4个品种。且这几种豆科牧草茎、叶、花、全株中总黄酮和总皂苷含量有极显著差异（P<0.01）,在整个生育时期,均为叶片中含量多于茎秆。小冠花、百脉根、红豆草、紫云英、草木樨、白三叶6种豆科牧草可作为提取总黄酮的优质材料;由于其总皂苷含量较低,不会造成家畜臌胀病,可在地上部生物量最高时刈割,用于青饲或调制干草。苜蓿总皂苷含量丰富,是提取皂苷产品的优质材料。对苜蓿中的天然活性物质进行分离,乙酸乙酯层主要含有2-甲叉-3-胆甾烷醇和3,5-二烯豆甾烷两种活性物质。氯仿层主要含有维生素D3活性物质。正丁醇层所含有活性物质种类较多,有6种天然活性成分,分别为芳樟醇、香芹醇、苦杏仁苷、氧化石竹烯、乙酸维生素A和邻苯二甲酸二丁酯。苜蓿提取液具有增强小鼠机体非特异性免疫功能和特异性免疫（体液免疫）功能的作用;体外具有抗菌作用,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有直接的抑制作用;对血脂具有双向调节作用,低剂量时具有降脂作用,减少了机体产生冠心病的危险,而高剂量时增加了冠心病发生的机率;苜蓿提取液具有抗氧化作用,显著升高机体肝和肾组织的SOD活性,降低MDA的含量。

论文目录

• 中文摘要
• summary
• 前言
• 第一章 文献综述
• 第二章 苜蓿黄酮类成分提取方法的研究
• 第一节 微波辅助提取方法的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料、仪器和试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 标准曲线的绘制方法
• 1.2.2 总黄酮提取量的测定
• 1.2.3 单因素实验
• 1.2.4 微波提取条件优化试验----正交试验
• 1.2.5 验证试验
• 2 结果与分析
• 2.1 乙醇浓度对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.2 微波处理时间对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.3 微波功率对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.4 提取次数对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.5 固液比对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.6 正交实验
• 3 讨论
• 4 结论
• 第二节 超声波辅助提取方法的研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料、仪器与试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 单因素试验
• 1.2.2 超声波提取条件优化试验----正交试验
• 2 结果
• 2.1 乙醇浓度对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.2 温度对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.3 固液比对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.4 超声波处理时间对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.5 超声次数对苜蓿总黄酮提取量的影响
• 2.6 正交试验
• 2.7 两种技术对苜蓿总黄酮提取量的比较
• 3 结论
• 4 讨论
• 第三章 多种豆科牧草总黄酮和总皂苷含量的研究
• 第一节 几种主要豆科牧草总黄酮含量的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料、仪器和试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 标准曲线的绘制方法
• 1.2.2 黄酮提取量的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 总黄酮含量的测定
• 2.1.1 比色法测定牧草总黄酮含量的线性关系及方法学考察
• 2.1.2 精密度试验
• 2.1.3 重现性试验
• 2.1.4 稳定性试验
• 2.2 不同生育时期、不同生长部位总黄酮含量的变化
• 2.3 不同牧草总黄酮含量的动态变化
• 3 结论
• 4 讨论
• 第二节 几种主要豆科牧草总皂苷含量的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料、仪器和试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 波长扫描
• 1.2.2 标准曲线的绘制方法
• 1.2.3 皂苷含量的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 波长扫描
• 2.2 精密度试验
• 2.3 重现性试验
• 2.4 稳定性试验
• 2.5 不同时期、不同部位总皂苷含量的变化
• 2.6 不同豆科牧草总皂苷含量的变化
• 3 结论
• 4 讨论
• 第四章 紫花苜蓿生理活性成分的提取
• 1 材料、试剂与仪器
• 2 方法
• 2.1 提取与分离
• 2.2 硅胶柱层析方法
• 2.3 凝胶柱层析方法
• 2.4 制备型薄层板的制备（Preparative-TLC）
• 3 结果与讨论
• 3.1 正丁醇层
• 3.2 氯仿层
• 3.3 乙酸乙酯层
• 4 小结
• 第五章 苜蓿提取物活性的动物试验
• 1 材料与方法
• 1.1 材料、仪器和试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 非特异性免疫功能试验
• 1.2.2 体液免疫功能试验
• 1.2.3 血清生化试验方法
• 1.2.4 抗菌试验
• 1.3 数据处理
• 2 结果
• 2.1 对免疫器官的影响
• 2.2 对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
• 2.3 对绵羊红细胞作免疫原的溶血素的影响
• 2.4 抗菌试验
• 2.5 对生化指标的影响
• 2.5.1 对血清甘油三酯（TG）的影响
• 2.5.2 对血清高密度脂蛋白（HDL-C）的影响
• 2.5.3 对血清低密度脂蛋白（LDL-C）的影响
• 2.5.4 对血清乳酸脱氢酶（LDH）的影响
• 2.5.5 对组织超氧化物歧化酶（SOD）的影响
• 2.5.6 对组织丙二醛的影响
• 3 结论
• 4 讨论
• 第六章 主要结论
• 第七章 创新点与应用前景
• 致谢
• 参考文献
• 导师简介: