论文摘要
目的:探讨 PI3K/AKT 通路在 TIMP-1 抑制高糖引起大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程中的作用和机制。 方法:⑴脂质体法将正、反义人 TIMP-1（hTIMP-1）及空载体转染到大鼠肾小球系膜细胞;⑵MTT 法检测加与不加 PI3K 抑制剂 LY294002时,高糖诱导 24 小时后细胞生存率;⑶流式检测凋亡率;⑷试剂盒检测 Caspase 9 活性;⑸RT-PCR 检测 Bcl-2 mRNA;⑹Western blot 检测BAD、phospho-BAD、AKT 、phospho-AKT 水平。 结果:通过 MTT 及流式检查发现,与对照组相比,正义转染组细胞的生存率高而凋亡率降低（P<0.05）,反义转染组生存率降低而凋亡率显著提高（P<0.05）,LY294002 的加入可部分抵消 TIMP-1 的抗凋亡作用。正义转染组、反义转染组和未转染组细胞的 Bcl-2 mRNA 表达较对照组均有升高,但三者之间无差异,LY294002 可使各组细胞 Bcl-2 mRNA 的表达明显下调。TIMP-1 的高表达或低表达,对 Caspase 9 活性的影响不显著。正义TIMP-1能提高细胞phospho-BAD、phospho-AKT的蛋白水平,而反义 TIMP-1 的两种蛋白水平明显减少,且该作用可被LY294002 阻断。 结论:（1）PI3K/AKT 通路参与 TIMP-1 抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程,BAD 在其中起重要作用;（2）AKT 上调 Bcl-2 mRNA 表达,但无显著性;（3）AKT 对 Caspase 9 的抑制在抗大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程中不起主要作用。
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标签：大鼠肾小球系膜细胞论文; 凋亡论文;