CpG寡脱氧核苷酸对中华绒螯蟹免疫功能调节作用的研究

论文摘要

CpG寡脱氧核苷酸（CpG oligodeoxynucleotides，CpG ODN），是人工合成的能够模拟细菌DNA的免疫刺激活性的含有CpG基序的ODN，大量研究表明，它们能激活人类、哺乳类及鱼类等动物的免疫系统，是一类良好的非特异性免疫增强剂与特异性免疫佐剂。但是，迄今为止，尚未见有关CpG ODNs对中华绒螯蟹免疫功能影响及其作用机理的研究报道。为探讨CpG ODNs对中华绒螯蟹蟹免疫功能及抗病力的影响，进行试验一。将ODN-1670（含1个CpG基序）和ODN-R（含1个反向CpG基序，即GpC）按1、5、25μg／kg体重的剂量体腔注射中华绒螯蟹，在注射之前（0d）和注射后第1、3、5、8d采样，同时以注射0.1mL生理盐水组与未进行任何处理的空白组作为对照，进行一系列免疫学指标的测定；并在第二次采样（第3d）时，从每个处理组中取蟹6只，以1.2×107cfu／kg体重的剂量体腔注射蟹致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株，记录接种7d后各组蟹的累积死亡率。结果显示，注射适量的ODN-1670能显著地增加中华绒螯蟹的血细胞总量（THC）、透明细胞（HC）、小颗粒细胞（SGC）和颗粒细胞（GC）数量，显著地增强血细胞的吞噬活性和呼吸爆发活性，显著地增强血清酚氧化酶（PO）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（ALP）、溶菌酶（LSZ）、溶血素（Hemocytin）及抗菌活性（Ua）（P＜0.05）。此外，本试验条件下，ODN-1670还能明显提高中华绒螯蟹对嗜水气单胞菌的抗感染能力。与此同时，试验剂量的ODN-R除能使血清酚氧化酶活性显著增加（P＜0.05）外，对其他免疫指标的影响均不显著。本试验表明，适量的ODN-1670能增强中华绒螯蟹的免疫功能和抗病力，是适合中华绒螯蟹的新型潜在免疫增强剂，可进一步加以研发和利用。为初步探讨CpG ODN激活中华绒螯蟹血细胞酚氧化酶原（proPO）激活系统的信号转导途径，进行试验二。用适量的CpG ODN和几种细胞信号转导的激活剂或抑制剂处理M-199培养的离体中华绒螯蟹血细胞，通过检测血细胞胞内外酚氧化酶（PO）的增减情况，对CpG ODN触发proPO激活系统的信号转导途径进行评价。结果表明，本次试验所选ODN-1670与ODN-R均可触发蟹血细胞proPO激活系统。两者的信号转导途径相似，有可能都包含了G-蛋白介导的蛋白激酶C（PKC）途径，酪氨酸蛋白激酶（RTK）途径对ODN-1670的触发proPO激活系统的活化过程进行负调控。而依赖于cAMP的蛋白激酶A（PKA）途径可能不参与两种ODN诱导的proPO系统的活化过程。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 文献综述
• 1 CpG寡脱氧核苷酸研究展
• 1.1 CpG基序的发现及其基本结构特点
• 1.2 含CpG基序的DNA或ODN的免疫学作用
• 1.3 CpG DNA（ODN）的免疫学作用机理
• 1.4 CpG DNA（ODN）的应用
• 1.5 CpG DNA（ODN）在水产养殖中的研究进展
• 1.6 展望
• 2 甲壳类动物免疫学研究进展
• 2.1 细胞免疫的研究
• 2.2 体液性免疫因子的研究
• 2.3 结语
• 试验一: CpG寡脱氧核苷酸对中华绒螯蟹免疫功能的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 试验二: CpG寡脱氧核苷酸触发中华绒螯蟹血细胞酚氧化酶原激活系统信号转导路径的研究
• 1 材料与方法
• 2结果
• 3 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文
• 致谢
• 详细摘要