高三尖杉酯碱抗人乳腺癌细胞的实验研究及其含量测定

论文摘要

高三尖杉酯碱系我国研制成功的高效抗肿瘤药。该药物能使核糖体解聚,抑制蛋白质合成,使肿瘤细胞减少,瘤组织核酸含量下降,研究显示高三尖杉酯碱对多种肿瘤有抑制作用,但对乳腺癌的研究尚未见报道,本文用体外人乳腺肿瘤细胞培养的方法,观察了高三尖杉酯碱对人乳腺癌细胞MDA-MB-453的抑制和诱导凋亡作用,以挖掘治疗乳腺癌的新药物。而提一克分析纯的高三尖杉酯碱,需要近吨的三尖杉,一公斤该碱价值70万美金,经济价值极高。因此,本文还探讨了高效毛细管电泳用于检测高三尖杉酯碱含量的新方法,为高三尖杉脂碱类药物有效成分含量的鉴定提供一定的依据。高三尖杉酯碱抗乳腺癌作用的初步研究实验（1）高三尖杉酯碱对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453的生长均有抑制作用,呈时间、剂量依赖关系,对MDA-MB-453细胞的IC50值为92μg/ml。（2）台盼蓝染色检测结果表明,高三尖杉酯碱20～80μg/ml作用于MDA-MB-453细胞24小时,细胞死亡率随药物浓度的增大而升高,而空白组活细胞率为98%,结果表明高三尖杉酯碱能够抑制人乳腺癌细胞生长。（3）MTT检测结果表明,高三尖杉酯碱10～160μg/ml作用于MDA-MB-453细胞24-72小时,细胞凋亡率随药物浓度的增大而升高。结果显示高三尖杉酯碱能够诱导人乳腺癌细胞死亡。（4）高三尖杉酯碱120μg/ml作用于MDA-MB-453细胞24h采用透射电镜观察可以发现细胞出现凋亡的形态学变化。毛细管电泳法测定高三尖杉酯碱注射液的含量（1）建立了高三尖杉酯碱注射液中高三尖杉酯碱含量测定的高效毛细管电泳法。磷酸二氢钠-硼砂为电泳介质,乙醇为有机添加剂,在20kV高压,pH 6.98,25℃的条件下检测了高三尖杉酯碱注射液中高三尖杉酯碱含量。（2）在最佳的试验条件下,药物浓度为横坐标（X）,峰面积为纵坐标（Y）之间呈现良好的线性关系,该法的线性范围为0.005～0.080mg/L。着重探讨了缓冲溶液浓度、种类、酸碱度及温度、其操作电压对检测的影响,结果表明毛细管电泳法测定高三尖杉酯碱注射液的含量,不仅操作简单、准确,而且重复性好。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 文献综述
• 引言
• 第一部分 高三尖杉酯碱抗人乳腺癌细胞的实验研究
• 1 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 药物
• 1.1.2 细胞株
• 1.1.3 试剂与仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 实验仪器的清洗
• 1.2.2 培养基的配置
• 1.2.3 高三尖杉酯碱溶液的制备
• 1.2.4 MDA-MB-453细胞传代培养
• 1.2.5 台盼蓝染色检测细胞活性
• 1.2.6 细胞增殖抑制实验-MTT
• 1.2.7 透射电镜观察
• 2 结果与分析
• 2.1 台盼蓝染色结果
• 2.2 抗人乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖
• 2.3 电镜结果
• 3 讨论
• 3.1 肿瘤细胞培养
• 3.1.1 组织培养肿瘤细胞生物学特征
• 3.1.2 培养基
• 3.2 台盼蓝染色
• 3.3 MTT法检测
• 3.4 透射电镜检测
• 4 结论
• 第二部分 高三尖杉酯碱注射液含量的毛细管电泳法测定
• 1 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 试剂
• 1.1.2 仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 标准溶液的制备
• 1.2.2 HPCE检测方法的建立
• 1.2.3 样品检测实验
• 2 结果与分析
• 2.1 HPCE检测方法的建立
• 2.1.1 检测波长
• 2.1.2 缓冲液类型的选择
• 2.1.3 缓冲液pH值的选择
• 2.1.4 运行电压的选择
• 2.1.5 分离温度的选择
• 2.1.6 电泳重合实验
• 2.2 标准曲线的绘制
• 2.3 精密度实验
• 2.4 回收率实验
• 2.5 样品测定
• 3 讨论
• 3.1 绘制标准曲线的意义
• 3.2 精密度与准确度意义
• 3.3 回收率意义
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介