论文摘要
第一部分SW872前脂肪细胞的诱导分化目的:观察油酸对SW872脂肪细胞的诱导分化作用,分别建立成熟脂肪细胞模型及U937巨噬细胞共培养模型。方法:采用不同浓度油酸诱导前脂肪细胞成熟分化,光学显微镜观察SW872前脂肪细胞形态学变化,即细胞内脂滴的形成,油红O染色观察胞浆中脂滴的聚集,化学比色法测定细胞中甘油三酯的总量。最后与U937巨噬细胞混合培养。结果:1.油酸诱导分化24h时,SW872细胞胞体由小变大,形态由梭形变为圆形,胞浆中出现细小的脂滴;诱导分化48h时,细胞体积进一步变大,几乎所有细胞形态变圆,胞浆中脂滴明显增多;诱导分化72h时,细胞呈戒环状,胞浆脂滴含量更多,油红O染色胞浆中可见丰富的脂肪染色。2.油酸诱导分化刺激24h时,细胞中甘油三酯总量增多;0.6mM诱导分化刺激48h时,甘油三酯总量是分化前的8.5倍（p<0.01）;诱导分化刺激72h时,甘油三酯总量是分化前的14倍（p<0.01）。随着油酸诱导浓度的升高,细胞中甘油三酯含量增加也更加迅速。结论:油酸刺激能成功地将SW872前脂肪细胞诱导分化为典型的成熟脂肪细胞。第二部分U937巨噬细胞共培养对SW872糖脂代谢及炎症状态的影响目的:观察U937巨噬细胞与SW872脂肪细胞共培养对脂肪细胞葡萄糖转运和其炎症因子分泌水平的影响,探讨炎症状态与脂肪细胞胰岛素抵抗的关系及其机制方法:1.采用[3H]-2-DG掺入法,观察基础状态及胰岛素刺激下,不同油酸浓度及巨噬细胞混合培养对SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率的影响。2.采用RT-PCR方法,测定不同油酸浓度及巨噬细胞混合配额样对SW872脂肪细胞和巨噬细胞TNF-α、MCP-1、Visfatin基因表达水平的影响。3.采用ELISE方法,测定不同油酸浓度及巨噬细胞混合配额样对SW872脂肪细胞和巨噬细胞TNF-α、MCP-1、Visfatin分泌水平的影响。结果:油酸诱导浓度0mmol/L至0.6mmol/L时,脂肪细胞葡萄糖摄取率呈升高趋势,0.8至1.2mmol/L时葡萄糖摄取率逐渐下降,但随着油酸诱导浓度的增加,TNF-α、MCP-1分泌及Visfatin基因表达水平均明显升高。在与巨噬细胞混合培养后,TNF-α、MCP-1分泌Visfatin基因表达水平进一步升高,而各组葡萄糖摄取率均受到抑制。同时巨噬细胞在混合培养前后,其自身炎症状态也同时升高。结论:油酸诱导SW872前脂肪细胞成熟分化,在高脂负荷下,不但造成了胰岛素抵抗,而且导致炎症因子水平急剧升高,巨噬细胞的趋化加重了脂肪细胞炎症状态负荷,进一步抑制了葡萄糖摄取,削弱胰岛素敏感性。第三部分U937巨噬细胞共培养对SW872增殖及凋亡的影响目的:观察U937巨噬细胞与SW872脂肪细胞共培养状态下,对脂肪细胞增殖及凋亡的影响,探讨巨噬细胞在脂肪细胞胰岛素抵抗形成中的意义。方法:1.利用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测U937巨噬细胞对SW872前脂肪细胞增殖的影响,2.采用流式细胞学（FCM）手段检测各组脂肪细胞在不同炎性反应状态下对细胞凋亡的影响。结果:随着油酸诱导浓度的增加及SW872前脂肪细胞分化成熟,脂肪细胞凋亡率亦逐渐增加（P<0.05）;在与U937巨噬细胞混合培养后,炎症状态改变对各脂肪细胞组混合培养前后的凋亡率无明显影响（P>0.05）;U937巨噬细胞的混合培养对SW872前脂肪细胞的增殖率有明显抑制作用（P<0.05）。结论:油酸诱导SW872前脂肪细胞成熟分化,在高脂负荷下,炎性反应因子分泌水平急剧升高,同时脂肪细胞凋亡率增加。炎症负荷改变对脂肪细胞凋亡率无明显影响。巨噬细胞的趋化加重了其炎性反应状态,并抑制了前脂肪细胞的增殖。
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