芳香开窍药冰片及石菖蒲对脑得生主要活性成分透过血脑屏障影响的研究

论文摘要

一、目的建立大鼠血浆及脑组织中羟基红花黄色素A （HSYA）、葛根素（Puer）、川芎嗪（TMP）及人参皂苷Rg1（Rg1）的测定方法。考察配伍芳香开窍药冰片或石菖蒲提取液对脑得生主要活性成分在大鼠体内的吸收以及透过血脑屏障（BBB）的影响。为芳香开窍药引经入脑提供实验依据。二、方法1实验动物及给药方法1.1实验动物分组选用清洁级健康成年雄性大鼠198只（220-260g）,按体重随机分3组：脑得生组（Ⅰ）、脑得生配伍冰片组（Ⅱ）、脑得生配伍石菖蒲组（Ⅲ）,每组6×11只。1.2给药剂量及制备方法按照《中国药典》2005版,冰片剂量取中等剂量日剂量28 mg·kg-1、石菖蒲日剂量3.0 g·kg-1。脑得生日剂量含HSYA 20 mg·kg-1、Puer 20 mg·kg-1、TMP 10 mg·kg-1、Rg120 mg·kg-1。石菖蒲提取液的制备：石菖蒲加蒸馏水浸泡30 min,加热蒸馏,收集挥发油水混合溶液,加入适量吐温80（终含量1%）,蒸馏水定容使得到3.0 g生药/mL的石菖蒲溶液。各组均配置成0.8%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）混悬液。1.3样品采集大鼠适应性喂养一周后,试验前一天禁食12 h。灌胃给药后,分别于10,20,30,45 min,1,1.5,2,3,6,8,12 h摘除眼球采血,肝素抗凝,于-70℃冰箱保存。试验完成后在冰台上快速取大鼠脑组织,剥离软脑膜,生理盐水洗净,滤纸吸干表面水分,称重,装入冻存管中,于-70℃冰箱保存。2生物样品的测定方法2.1采用UPLC-MS/MS测定血浆及脑组织匀浆中脑得生主要活性成分Puer、TMP、Rg1的浓度。2.2采用HPLC测定血浆及脑组织匀浆中脑得生活性成分HSYA的浓度。3数据处理以SPSS 13.0统计软件分析处理,各组大鼠脑血比（AUCbrain/AUCblood）用单因素方差分析检验。三、结果1方法学1.1Puer、TMP、Rgl的测定方法学血浆及脑组织中Puer、TMP、Rgl均与内标和内源性物质分离良好。血浆内Puer、TMP、Rgl和内标各待测物保留时间分别为3.16、2.18、3.59、2.59 min,脑匀浆中各待测物的保留时间分别为3.14、2.17、3.59、2.65 min。在12.50-5000.00 ng·mL-1线性范围内各待测物在血浆及脑组织中的线性良好,最低定量限分别为10 ng·mL-1 12.5 ng·mL-1、1Ong·mL-1。血浆中萃取回收率各待测物>80.77%,脑匀浆中各待测物>78.13%,日间和日内精密度在血浆中各待测物<10.27%,脑匀浆中各待测物低浓度<16.12%,中、高浓度<11.88%。1.2 HSYA的测定方法学血浆及脑组织内HSYA均与内标和内源性物质很好的分离。HSYA和内标的出峰时间分别为6.2 min和11.9 min。在40.00-2000.00 ng·mL-1线性范围内HSYA血浆及脑组织中线性良好,最低定量限均为40.00 ng-mL-1。血浆及脑组织内HSYA的萃取回收率分别>85.07%、>83.49%；日内精密度RSD分别<11.20%、<5.13%；日间精密度RSD分别<8.15%、<9.14%。2动物实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组中HSYA的AUC brain/AUC blood分别为0.69±0.044、0.98±0.054及1.64±0.082；Puer的AUC brain/AUC blood分别为0.58±0.11、0.61±0.04及0.78±0.04；TMP的AUC brain/AUC blood分别为0.0069±0.00085、0.0072±0.0010、0.014±0.0022。Rgl在血浆中的AUC0→12分别为9289.98±1750.48、13792.73±2065.88、15620.05±2936.68,在脑组织中未被检测到。四、结论1方法学本实验方法可准确、快速测定大鼠血浆及脑匀浆中HSYA、Puer、TMP、Rgl浓度,用以芳香开窍药对脑得生主要活性成分透过BBB影响的考察。2动物实验冰片促进HSYA、Puer、TMP、Rgl吸收入血并增加HSYA、Puer、TMP脑组织内浓度,可有效增加BBB的通透性；石菖蒲提取液抑制HSYA、Puer吸收入血而提高TMP、Rg1的生物利用度,同时促进HSYA、Puer、TMP进入脑组织内,有效地提高BBB的通透性。由冰片及石菖蒲两种芳香开窍药类引经药促进脑得生主要活性成分透过BBB的作用得出结论：芳香开窍药可以作为脑引经药开启BBB,促进药物透过BBB进入脑部。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 本文所用英文缩写词表
• 前言
• 第一章 UPLC-MS/MS测定血浆及脑组织匀浆中葛根素、川芎嗪、人参皂苷Rg1浓度方法学的建立
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 2 方法
• 2.1 溶液的配制
• 2.2 色谱条件
• 2.3 质谱条件
• 2.4 样品处理
• 2.5 质控样品
• 2.6 方法学考察
• 3 结果
• 3.1 色谱-质谱行为
• 3.2 方法学考察
• 4 讨论
• 第二章 HPLC测定血浆及脑组织匀浆中羟基红花黄色素A浓度方法学的建立
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 2 方法
• 2.1 溶液配制
• 2.2 色谱条件
• 2.3 样品处理
• 2.4 质控样品
• 2.6 方法学考察
• 3 结果
• 3.1 色谱行为
• 3.2 方法学考察
• 4 讨论
• 第三章 芳香开窍药冰片及石菖蒲对脑得生主要活性成分透过血脑屏障影响的考察
• 1 材料与方法
• 1.1 仪器与试剂
• 2 动物实验
• 2.1 实验动物和饲养环境
• 2.2 实验动物分组
• 2.3 给药剂量及制备方法
• 2.4 样品采集
• 2.5 样品测定
• 2.6 数据处理
• 3 结果
• 第四章 芳香开窍药促进药物透过血脑屏障的探讨
• 1 芳香开窍药冰片的促透作用
• 2 芳香开窍药石菖蒲提取液促进药物透过BBB的作用
• 3 Rg1对脑疾病治疗作用的机制探讨
• 4 芳香开窍药促进药物透过BBB的作用探讨
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果